[发明专利]控制黄瓜无卷须性状的基因及与黄瓜卷须性状相关的SNP标记

权利要求书

1.黄瓜Csa5G644520蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.控制黄瓜无卷须性状的基因Csa5G64452，其特征在于，其核苷酸序列为：

i)Seq ID No.2所示的核苷酸序列；或

ii)在严格条件下与Seq ID No.2所示序列杂交的核苷酸序列；

所述严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜。

3.含有权利要求2所述基因Csa5G64452的载体。

4.含有权利要求2所述基因Csa5G64452的工程菌。

5.权利要求2所述基因Csa5G64452在控制黄瓜无卷须性状中的应用。

6.一种与黄瓜卷须性状相关的SNP标记，其特征在于，其位于如Seq ID No.2所示的控制黄瓜无卷须性状的基因Csa5G64452第1012bp处，此处碱基为T的黄瓜表现为无卷须性状，而此处碱基为A的黄瓜表现为有卷须性状。

7.用于检测权利要求6所述SNP标记的特异性引物对，其特征在于，包括正向引物F 5’-AATAATATCATTGGGATCATGTGG-3’和反向引物R 5’-TTGGAAGCTGGAAAATAGAAAATAT-3’。

8.一种鉴定有无卷须性状黄瓜的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测黄瓜的基因组DNA；

2)以待测黄瓜的基因组DNA为模板，利用权利要求7的引物对，进行PCR扩增反应；

PCR扩增体系以20μl计为：10-20ng/μl模板DNA 1μl，10pmol/μl引物F和R各1μl，10mmol/L dNTP mix 0.4μl，0.5U/μL Taq DNA聚合酶0.3μl，10×PCR反应缓冲液2μl，余量为水；

PCR反应条件为：94℃4分钟；94℃20秒，55℃20秒，72℃30秒，35个循环；72℃5分钟；

3)检测PCR扩增产物，具体如下：

采用dCAPS法检测PCR扩增产物：用内切酶SspI对PCR扩增产物进行酶切，并对酶切产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如果检测结果仅为一条140bp大小的条带，则待测黄瓜在位于如Seq ID No.2所示的控制黄瓜无卷须性状的基因Csa5G644520序列第1012bp处的碱基为T，属于无卷须性状的黄瓜品种；检测结果为一条117bp大小的条带，或同时含有140bp和117bp两条带，则待测黄瓜在位于如Seq ID No.2所示的控制黄瓜无卷须性状的基因Csa5G644520序列第1012bp处的碱基为A或A/T杂合，属于有卷须性状的黄瓜品种。

9.含有权利要求7所述引物对的用于检测黄瓜有无卷须性状的试剂盒。

10.权利要求6所述与黄瓜卷须性状相关的SNP标记在黄瓜分子标记辅助育种中的应用。