[发明专利]控制黄瓜无卷须性状的基因及与黄瓜卷须性状相关的SNP标记

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，具体地说，涉及控制黄瓜无卷须性状的基因Csa5G64452及与黄瓜卷须性状相关的SNP标记。

背景技术

无卷须是黄瓜的重要株型性状。几乎所有的黄瓜资源和品种都具有卷须性状，在来源于西双版纳地区的黄瓜品种中发现一份罕见的无卷须的黄瓜资源，该黄瓜资源没有卷须。卷须是黄瓜的攀援器官，但在人工栽培条件下通过支架和绑蔓，卷须已经失去它应有的作用，变为无用器官。但卷须作为一个器官仍然存在于植株上，几乎节节都会发生，卷须攀援消耗大量的养分，并且卷须会与同节位雌花强烈地竞争养分。在黄瓜的大田生产中，为实现高产，经常需要打掉卷须，花费大量的人力物力。因此培养无卷须黄瓜成为黄瓜株型育种改良的新方向。

分子育种，即分子标记辅助选择育种，是指利用DNA分子标记对育种材料进行选择，综合改良作物的重要经济性状，是传统遗传育种与现代分子生物学有机结合的育种方法。分子育种为农作物育种开辟了一条新的途径，随着现代生物技术的发展，分子标记在农作物育种中的作用将日益突出。在黄瓜育种中，人们希望选择与黄瓜卷须性状密切相关的DNA标记，以实现早期选种和提高育种准确性的目标，从而加快遗传育种进程。

传统的遗传学表明，黄瓜无卷须性状由一对隐性基因控制，但关于黄瓜无卷须性状的遗传定位和分子机制还不清楚，导致相关的分子育种工作进展缓慢。

发明内容

本发明的目的是提供控制黄瓜无卷须性状的基因Csa5G64452。

本发明的另一目的是提供与黄瓜卷须性状相关的SNP标记及其应用。

本发明的再一目的是提供用于检测所述与黄瓜卷须性状相关的SNP标记的引物对及含有该引物对的试剂盒。

为了实现本发明目的，本发明首先提供一种黄瓜Csa5G644520蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

本发明还提供控制黄瓜无卷须性状的，且编码所述Csa5G644520蛋白的基因Csa5G64452，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，或在严格条件下与Seq ID No.2所示序列杂交的核苷酸序列。所述严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜。

本发明还提供含有基因Csa5G64452的载体。

本发明还提供含有基因Csa5G64452的转基因细胞系。

本发明还提供含有基因Csa5G64452的工程菌。

本发明还提供基因Csa5G64452在控制黄瓜无卷须性状中的应用。

进一步地，本发明提供一种与黄瓜卷须性状相关的SNP标记，其位于如Seq ID No.2所示的控制黄瓜卷须发育的基因Csa5G644520第1012bp处，此处碱基为T的黄瓜表现为无卷须性状，而此处碱基为A的黄瓜表现为有卷须性状。

本发明还提供用于检测上述与黄瓜卷须性状相关的SNP标记的特异性引物对，包括正向引物F 5’-AATAATATCATTGGGATCATGTGG-3’和反向引物R 5’-TTGGAAGCTGGAAAATAGAAAATAT-3’。

本发明还提供一种鉴定有无卷须性状的黄瓜品种的方法，包括以下步骤：1)提取待测黄瓜的基因组DNA；2)以待测黄瓜的基因组DNA为模板，利用上述引物F和R，进行PCR扩增反应；

PCR扩增体系以20μl计为：10-20ng/μl模板DNA 1μl，10pmol/μl引物F和R各1μl，10mmol/L dNTP mix 0.4μl，0.5U/μL Taq DNA聚合酶0.3μl，10×PCR反应缓冲液2μl，余量为水；

PCR反应条件为：94℃4分钟；94℃20秒，55℃20秒，72℃30秒，35个循环；72℃5分钟；

3)检测PCR扩增产物，具体如下：