[发明专利]一种抗氧化多肽及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及水产食品加工领域，具体涉及一种以鲢鱼鱼肉为原料生产的具有抗氧化功能的生物活性肽，以及该抗氧化多肽的制备方法与应用。

背景技术

蛋白质经过水解得到多肽，使得蛋白质的结构被改变，疏水区的活性官能基团暴露，随着肽键的裂解，游离氨基酸增加，从而可以提供质子或电子源，保持较高的氧化还原电位，使其具有清除活性自由基的能力，具有抑制脂质过氧化作用的发生，从而抗氧化肽的抗氧化活性得以提高。氧化对需氧生物特别是脊椎动物和人类是一个重要的代谢过程，但是它却导致了自由基的形成。自由基是高度不稳定的、易于和其他分子发生化学反应，活性氧自由基(ROS)被认为能引起氧化应激。氧化应激涉及多种人类疾病如癌症，动脉粥样硬化，糖尿病，神经系统疾病，如阿尔茨海默病，帕金森氏病等等，以及老龄化。在食品体系中，脂类或蛋白质可能会受到ROS的攻击经历氧化过程，从而导致食品产生不愉快味道，颜色发暗，同时也可能产生潜在的毒性产物。抗氧化多肽的应用能使人体免受氧化应激的破坏，并防止食品成分由于捐献电子给ROS以及中和ROS的负面作用而变质。因此抗氧化肽在医学、化妆品、生物、食品领域有广泛的应用价值。

目前，国内外专利对于抗氧化肽的开发均有所涉及。(1)专利EP1188767A1公开了一种来源于酪蛋白的抗氧化肽的制备和分离纯化方法；(2)专利US 7273847制备了来自肺表面活性蛋白化合物的多肽具有抑制脂肪氧化的作用和抗菌性；(3)专利US8232243B2公开了含有色氨酸和酪氨酸的肽作为抗氧化的方法，这种抗氧化剂可以用于治疗和预防氧化过程带来的疾病和综合征；(4)专利CN103275180A公开了一种马面鲀鱼头蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途，该抗氧化肽的氨基酸序列为Leu-Ser-His-Gly-Pro-Tyr(LSHGPY)，分子量为672Da；(5)专利CN 103103242A公开了一种抗氧化活性肽及其制备方法，其特征在于以蓝圆鲹鱼肉蛋白为原料，采用枯草杆菌2709产生的碱性蛋白酶水解，水解液灭酶后经离心、超滤、凝胶层析和反相高效液相色谱等分离并确定其中两种天然抗氧化肽的结构，其氨基酸序列分别为His-Asp-His-Pro-Val-Cys(组氨酸-天冬氨酸-组氨酸-脯氨酸-缬氨酸-半胱氨酸)和His-Glu-Lys-Val-Cys(组氨酸-谷氨酸-赖氨酸-缬氨酸-半胱氨酸)；(6)专利CN103431158A公开了一种鸭肉蛋白源抗氧化肽的酶法制备工艺，包括酶解底物的制备、酶解方法和检测等步骤。

目前，国内外专利中未见以淡水鱼鱼肉为资源，利用胃蛋白酶制备抗氧化肽的相关报道。

发明内容

本发明的第一目的在于，针对抗氧化多肽产品开发的现状，提供一种全新的、具有优异抗氧化性能的多肽。

本发明提供了一种抗氧化多肽，其氨基酸序列为：

Tyr-Thr-Ile-Gln-Tyr。

所述多肽可以以鲢鱼鱼肉为原料通过酶解后得到，也可以通过多肽固相合成等方法得到。

本发明的另一目的在于提供一种简便、高效、低成本地制备所述抗氧化多肽的方法。

具体的，所述制备方法包括以下步骤：

1)以鲢鱼鱼肉为原料，加水混合，于80～90℃水浴中静置15～20min，匀浆，得到鱼肉匀浆液；

2)在步骤1)所得鱼肉匀浆液中加入胃蛋白酶进行酶解，充分反应后，在95～100℃下保温3～5min，冷却至室温，离心，收集上清液；

3)取步骤2)所得上清液，用孔径为2500-3000道尔顿陶瓷膜进行超滤，得到含有所述抗氧化多肽的多肽溶液。

本发明步骤1)中，水的加入量与鱼肉重量比优选为1～3:1；所述匀浆的条件为10000～13000rpm，匀浆时间优选为1～3min。

本发明步骤2)中，胃蛋白酶的加入量与步骤1)所述鲢鱼鱼肉原料的重量比优选为1：100～300；所述酶解的具体条件为：在pH 1.8～2.5、35～40℃的条件下进行反应，酶解反应应该充分进行，反应时间优选为0.25～2.0h；所述离心的条件为4000～6000g，离心时间优选为5～10min。

本发明步骤3)中，利用孔径为2500-3000道尔顿陶瓷膜，采用常规操作进行超滤，收集分子量小于滤膜孔径的多肽的溶液，该混合溶液中富集了本发明请求保护的抗氧化多肽。该混合溶液进行浓缩、干燥后，可以得到含有目标多肽的多肽混合物。

本发明提供的制备方法还可以包括对所述混合溶液/混合物的纯化步骤，纯化产物经浓缩、冷冻干燥后，即可得到纯度较高的目标抗氧化多肽。