[发明专利]金边玉簪的组织培养快繁方法

权利要求书

1.一种金边玉簪的组织培养快繁方法，其特征是：包括以下几个步骤：

1)外植体的选择：春季，选择健康植株萌发出来的嫩芽，用锋利刀片切下；

2)外植体灭菌：切去叶片的2/3，先用自来水洗净后，加适量洗洁精自来水冲洗30-40分钟，用滤纸吸干；加入质量百分比浓度1‰氯化汞溶液，加2滴吐温20(Tween20)浸泡，量至漠过外植体材料，摇晃，8-10分钟后倒掉消毒液，然后，用无菌水冲洗外植体材料3-5次，表面没有泡沫后，吸干；

3)初代培养：将消毒好的外植体切去边缘，插于基本培养基(MS)上，培养20-30天。培养室内为22-25℃，光14小时，黑暗10小时,光照强度为1800～2000勒克斯(Lux)，Lux为：照度的国际单位；

4)增殖培养：将初代培养外植体材料，转接于MS+NAA0.1+6BA2培养基上培养4-6周后，所述培养基构成为：基本培养基(MS)附加0.1mg/L萘乙酸(NAA)和2mg/L6-苄胺基嘌呤(6-BA),每个外植体萌发出4-8个小侧芽；切取新长出的侧芽，去叶片后插入增殖培养基中，若需大量繁殖，可进行重复培养；培养室内为22-25℃，光14小时，黑暗10小时，光照强度为1800～2000勒克斯(Lux)；

5)壮苗培养：将长到1-2cm长的丛生芽剪切后移入壮苗培养基基本培养基(MS)中，培养3-4周，无菌苗长到2-4cm高度即可转入生根培养基中，增殖培养中的较大的无菌苗可直接转入生根培养基中。培养室内22-25℃，光14小时，黑10小时，光照强度为1800～2000勒克斯(Lux)；

6)生根培养：将在壮苗培养基中无菌苗转接至生根培养基1/2MS+NAA0.5+IBA1+活性炭，所述培养基构成为：基本培养基(MS培养基中大量元素含量减半)附加0.5mg/L萘乙酸(NAA)、1mg/L吲哆丁酸(IBA)和活性炭3000mg/L,于24-26℃，光12小时，黑12小时，光照强度为1800～2000勒克斯(Lux)，培养1-2周；

7)驯化移栽：待根长1-2cm时，将瓶苗移置过渡培养间。瓶膜稍敞开，但并不完全揭开，保持瓶内与室内环境一至，1-2天后，去掉瓶膜1天。调水温20-22℃，洗去无菌苗根部的培养基，移入含有珍珠岩：蛭石体积比2：1的基质中，在保湿保温条件下进行驯化培育，逐步降低湿度、温度，30天后，计算成活率。

2.根据权利要求1所述的一种金边玉簪的组织培养快繁方法，其特征是：基本培养基(MS)中所述大量元素，由质量百分比浓度，1900mg/L的硝酸钾(KNO₃)，440mg/L的氯化钙(CaCl₂·2H₂O)，370mg/L的硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)，1650mg/L的硝酸铵(NH₄NO₃)，170mg/L的磷酸二氢钾(KH₂PO₄·H₂O)组成，配制大量元素母液1L，10倍量，分别取19000mgKNO₃、4400mgCaCl₂·2H₂O、3700mgMgSO₄·7H₂O、16500mgNH₄NO₃、1700mg KH₂PO₄·H₂O，分别溶解后混合定容至1L，每配置1L培养基取大量元素母液100ml；微量元素由体积百分比浓度为22.3mg/L的硫酸锰(MnSO₄·4H₂O)，6.2mg/L的硼酸(H₃BO₃)，8.6mg/L的硫酸锌(ZnSO₄·7H₂O)，0.25mg/L的钼酸钠(Na₂M_oO₄·2H₂O)，0.025mg/L的硫酸铜(CuSO₄·5H₂O)，0.025mg/L的氯化钴(CoCl₂·6H₂O)，0.83mg/L的碘化钾(KI)组成，配置微量元素母液1L，100倍量，分别取2230mgMnSO₄·4H₂O、620mgH₃BO₃，860mgZnSO₄·7H₂O，25mgNa₂M_oO₄·2H₂O，2.5mgCuSO₄·5H₂O，2.5mgCoCl₂·6H₂O，83mgKI，分别溶解后混合定容至1L，每配置1L培养基取微量元母液10ml；铁盐由质量百分比浓度为27.8mg/L的硫酸亚铁(FeSO₄·7H₂O)和质量百分比浓度为37.3mg/L的乙二胺四乙酸二钠(Na₂·EDTA·2H₂O)螯合后的溶液(EDTA-Fe)组成，配置铁盐母液1L，分别取2780mgFeSO₄·7H₂O、3730mgNa₂·EDTA·2H₂O，分别加热溶解，混合后再煮沸约20分钟，冷却后定容至1L，每配置1L培养基取铁盐溶液10ml；有机物由质量百分比浓度为0.5mg/L的烟酸，0.5mg/L的盐酸吡哆醇，0.4mg/L的盐酸硫胺素，2mg/L的甘氨酸，100mg/L的肌醇组成，配置有机物母液1L，分别取50mg的烟酸，50mg的盐酸吡哆醇，40mg的盐酸硫胺素，200mg的甘氨酸，10000mg的肌醇，分别溶解，混合后定容至1L，每配置1L培养基取有机物母液10ml；蔗糖30g/L，琼脂粉5g/L，pH值5.8～6.2。