[发明专利]金边玉簪的组织培养快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种金边玉簪的组织培养快繁方法。

技术背景

金边玉簪为百合科、玉簪属多年生草本宿根花卉，花白色或紫色，耐寒、耐荫，在浓荫通风处生长茂盛，是园林中林下地被植物，岩石园等处的重要的绿化材料。引自美国的金边玉簪是近年来园林绿化的新品种，备受人们喜爱，其叶片质地厚、有黄边相嵌，白色的花朵带着香气，既是极好的园林景观花卉，又是极具开发前景的药用植物。由于金边玉簪种子繁殖后代性状易发生变化，又需要三年才能开花；此品种生长较慢，分株繁殖速度较慢，增殖系数极低，每年仅能增殖2-4倍，极大地影响金边玉簪的生产与应用，因此周年生产受阻。

发明内容

本发明以优化再生体系为目的，以保持遗传稳定性为核心，提供一种金边玉簪高效再生体系建立的方法，以解决现在金边玉簪种子繁殖变异大、分株繁殖速度慢、不能满足产业化需求的问题。

本发明的技术方案为：一种金边玉簪植株再生体系建立的方法，所述再生体系建立方法是通过植株侧芽为外植体，分化出不定芽，经增殖、壮苗、生根、移栽驯化方法培育出小植株,本发明方法提高无菌苗分化率，增殖速度快，生根率高，驯化成活率高，为保持金边玉簪原有优良属性及规模化生产提供可靠的技术，其特征在于包括以下几个步骤：

1)外植体的选择：春季，选择健康植株萌发出来的嫩芽，用锋利刀片切下；

2)外植体灭菌：切去叶片的2/3，先用自来水洗净后，加适量洗洁精自来水冲洗30-40分钟，用滤纸吸干；加入质量百分比浓度1‰氯化汞溶液，加2滴吐温20(Tween20)浸泡，量至漠过外植体材料，摇晃，8-10分钟后倒掉消毒液，然后，用无菌水冲洗外植体材料3-5次，表面没有泡沫后，吸干；

3)初代培养：将消毒好的外植体切去边缘，插于基本培养基(MS)上，培养20-30天。培养室内为22-25℃，光14小时，黑暗10小时,光照强度为1800～2000勒克斯(Lux)，Lux为：照度的国际单位；

4)增殖培养：将初代培养外植体材料，转接于MS+NAA0.1+6BA2培养基上培养4-6周后，所述培养基构成为：基本培养基(MS)附加0.1mg/L萘乙酸(NAA)和2mg/L6-苄胺基嘌呤(6-BA),每个外植体萌发出4-8个小侧芽；切取新长出的侧芽，去叶片后插入增殖培养基中，若需大量繁殖，可进行重复培养；培养室内为22-25℃，光14小时，黑暗10小时，光照强度为1800～2000勒克斯(Lux)；

5)壮苗培养：将长到1-2cm长的丛生芽剪切后移入壮苗培养基基本培养基(MS)中，培养3-4周，无菌苗长到2-4cm高度即可转入生根培养基中，增殖培养中的较大的无菌苗可直接转入生根培养基中。培养室内22-25℃，光14小时，黑10小时，光照强度为1800～2000勒克斯(Lux)；

6)生根培养：将在壮苗培养基中无菌苗转接至生根培养基1/2MS+NAA0.5+IBA1+活性炭，所述培养基构成为：基本培养基(MS培养基中大量元素含量减半)附加0.5mg/L萘乙酸(NAA)、1mg/L吲哆丁酸(IBA)和活性炭3000mg/L,于24-26℃，光12小时，黑12小时，光照强度为1800～2000勒克斯(Lux)，培养1-2周；

7)驯化移栽：待根长1-2cm时，将瓶苗移置过渡培养间。瓶膜稍敞开，但并不完全揭开，保持瓶内与室内环境一至，1-2天后，去掉瓶膜1天。调水温20-22℃，洗去无菌苗根部的培养基，移入含有珍珠岩：蛭石体积比2：1的基质中，在保湿保温条件下进行驯化培育，逐步降低湿度、温度，30天后，计算成活率。

本发明采用组织培养技术，建立其高效再生体系，能够保持原品种优良性状，快速提高繁殖速度，满足生产需求进行产业化生产。本发明从外植体选择、消毒方法、初代培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养及驯化移栽方法，建立了一套完整的金边玉簪植株再生体系，确定了组培繁殖培养基配方，直接分化不定芽，不定芽分化率达100％，一代增殖系数为5.3,生根率达到90.12％，移栽成活率达92％以上。本发明以植株基部分化芽为外植体，以MS为基本培养基，利用萘乙酸(NAA)、6-苄胺基嘌呤(6BA)，吲哆丁酸(IBA)激素调节，建立金边玉簪再生体系的方法。该发明一个增殖继代周期为4-6周，增殖系数控制在4-6倍，且不受季节的影响，可极大提高种苗繁殖系数，为该品种的开发和利用提供科学、有效的繁殖方法，满足生产需求进行产业化生产。

附图说明

图1  增殖培养示意图

图2  壮苗培养示意图