[发明专利]表面离子共振技术检测新城疫病毒的非诊断性方法

权利要求书

1.表面离子共振技术检测新城疫病毒的非诊断性方法，其特征在于，包括下列步骤：

（1）鼠抗抗体的偶联：鼠抗抗体与表面离子共振系统中的生物传感器芯片偶联；

（2）新城疫单克隆抗体的捕获及捕获浓度的确定；

（3）样品的检测：将待测样品流过表面离子共振系统中的生物传感器芯片的流池，测定混合物流过芯片之前和之后相应流池的信号差值，根据上述信号差值确定所述病毒是否存在及其含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括下列步骤：

（1）鼠抗抗体的偶联：

（a）样品无需预处理，利用HBS作为缓冲液，设定偶联引导模式：在Surface Preparation窗口中，同时选择Immobilisation和芯片Sensor Chip: CM5及Amine Coupling方法，同时设置不偶联鼠抗抗体的空白参比通道；

（b）将所有试剂平衡到室温20-25℃，设定加样流速为10μL/min；

（c）以inject方式进样，顺次用110μLNHS/EDC混合液活化芯片表面，再加入过量的鼠抗抗体偶联在活化后的芯片表面上，偶联完毕后用60μL Ethanolamine HCl封闭，使过量的反应基团失活；

（d）分析偶联效果：通过在开始注射鼠抗抗体前放置一个基线报道点，并在注射Ethanolamine HCl结束后放置第二个报道点，如信号差在1000-5000RU之间，则结合鼠抗的水平良好；

（2）新城疫单克隆抗体的捕获及适当捕获浓度的确定：

（a）将0.1~0.5μg/ml的含新城疫单克隆抗体的腹水样品和100~1000nM的新城疫重组蛋白抗原，经0.22μm的微孔过滤备用；

（b）在配体通道上进样10μL单抗腹水样品，然后同时在空白参比通道和配体通道上进样3min抗原，解离5min，设定流速为10μL/min；

（c）控制捕获单抗后抗原检测的RU信号差值处在30~50RU之间，以此确定为合适的单抗捕获浓度，后续的样品检测均以此捕获浓度的单抗进样；最后用pH3.0的缓冲液10mM Glycine HCl进行再生，去除新城疫单克隆抗体；

（3）样品的检测

（a）待检抗原经0.22μm的微孔过滤备用；

（b）在相应的预要捕获新城疫单克隆抗体的配体通道上进样，设定流速为10μL/min，进样10μL确定好浓度的新城疫单克隆抗体；

（c）分别注射25μL的HBS缓冲液作为阴性对照和待检抗原，顺次进样与新城疫单克隆抗体结合，并限定120s解离时间，最后用pH3.0的缓冲液10mM Glycine HCl进行再生；

（d）通过在开始注射新城疫单克隆抗体后放置一个基线报道点，并在注射待检样品后放置第二个报道点，阴性对照无任何差值，阳性样品信号有差值，以此确定有新城疫病毒的存在。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，生物传感器芯片为CM5芯片。