[发明专利]酵母蛋白的提取试剂

说明书

本发明公开了一种酵母蛋白的提取试剂，包括：溶液A和溶液B；其中，溶液A是一种碱溶液；溶液B中含有20～200mM Tris‑HCl、体积浓度为0.1％～3％的TritonX‑100、5～40mM EDTA、0.1g/100mL～2g/100mL的SDS、2～200mMβ‑巯基乙醇和1～10M尿素。本发明的试剂制备简单，而且使用时，蛋白的提取步骤简单、操作方便、无需使用昂贵的实验仪器和破壁酶等，裂解效率与经典的玻璃珠破碎方法相当，且可以处理大量样品。

技术领域

本发明涉及一种蛋白的提取试剂，特别是涉及一种酵母蛋白的提取试剂。

背景技术

毕赤酵母表达系统是近十年发展起来的真核表达体系，是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一，与现有的其它表达系统相比，毕赤酵母作为真核表达系统在表达产物的加工、外分秘、翻译后修饰以及糖基化修饰等方面有明显的优势，现已在科研领域和制药工业领域广泛用于外源蛋白的表达。

目前毕赤酵母表达系统多应用于胞外蛋白表达，而膜蛋白如GPCR等疏水性蛋白只能胞内表达。因为酵母细胞具有很厚的细胞壁，其破碎需要昂贵的仪器进行机械破碎或者细胞壁溶解酶处理等，工艺复杂，这限制了毕赤酵母表达系统对于不可溶性蛋白表达的应用。目前虽有文献报道的酵母裂解方法以及商业化的试剂，但应用狭窄、效率低下，而且放大处理成本高，效果不理想。

因此，开发一款高效方便的毕赤酵母裂解试剂十分必要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种酵母蛋白的提取试剂。该试剂解决了毕赤酵母裂解蛋白提取的难点。

为解决上述技术问题，本发明的酵母蛋白的提取试剂，其包括：溶液A和溶液B；

其中，溶液A是一种碱溶液；

溶液B中含有20～200mM Tris-HCl、体积浓度为0.1％～3％的TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)、5～40mM EDTA(乙二胺四乙酸)、0.1g/100mL～2g/100mL的SDS(十二烷基硫酸钠)、2～200mMβ-巯基乙醇(β-mercaptoethanol)和1～10M尿素(Urea)。其中，溶液B中的各组分浓度是在溶液B中的终浓度。

优选地，所述酵母为毕赤酵母。

所述溶液A优选为KOH溶液或NaOH溶液，更优选为0.1～1M KOH溶液或0.1～1MNaOH溶液。

另外，本发明还公开了一种酵母蛋白(总蛋白)的提取方法，其包括步骤：

酵母细胞先经过溶液A水浴处理后，收集细胞再经过溶液B处理，得到酵母蛋白(蛋白裂解液)。其中，所述酵母优选为毕赤酵母。

更具体地，上述提取方法，包括步骤：

1)将培养的酵母离心，收集酵母；

2)按照每克酵母湿重加入0.5～1ml水重悬菌体，得到菌体液后，加入上述溶液A，水浴孵育后，离心，去上清，收集酵母；

3)按照每克酵母湿重加入2～3ml上述溶液B，震荡，离心，得到酵母蛋白。

所述步骤1)中，离心的条件优选为2500～3500g离心3～8分钟。

所述步骤2)中，溶液A的加入量与菌体液的体积比为1～1.2:1(优选1:1)；水浴孵育的条件优选为50～70℃，孵育时间优选为5～20分钟。

所述步骤3)中，震荡的条件优选为在室温下摇床震荡20～40分钟。

本发明的蛋白提取试剂制备简单，而且使用时，蛋白的提取步骤简单、操作方便、无需使用昂贵的实验仪器和破壁酶等，裂解效率与经典的玻璃珠破碎方法相当，且可以处理大量样品。