[发明专利]一种采用液相色谱法测定阿普斯特及其制剂中杂质的方法

权利要求书

1.一种采用液相色谱法测定阿普斯特及其制剂中杂质的方法，包括：

a）采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱；

b）以缓冲溶液为流动相A，甲醇与乙腈的混合溶剂为流动相B；

c）流动相采用梯度洗脱方法，流速为0.8ml/min～1.2ml/min，用紫外检测器进行检测；

其中，所述缓冲溶液为磷酸、磷酸盐溶液或它们的混合物，甲醇与乙腈的体积比为60：40至40：60；所述杂质选自下列化合物中一种或多种：4-氨基-2-[1-（3-乙氧基-4-甲氧基苯基）-2-（甲基磺酰基）乙基]-1H-异吲哚-1,3（2H）-二酮、3-乙酰基邻苯二甲酸、N-{2-[1-（3-乙氧基-4-羟基苯基）-2-（甲基磺酰基）乙基]-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基}乙酰胺、N-{2-[1-（3-乙氧基-4-羟基苯基）-2-（甲基磺酰基）乙基]-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基}乙酰胺、N-{2-[1-（3-乙氧基-4-甲氧基苯基）-2-（甲基磺酰基）乙基]-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基}-2-羟基乙酰胺、3-硝基邻苯二甲酸、（S）-1-（3-乙氧基-4-甲氧基苯基）-2-(甲基磺酰基)乙胺，N-乙酰基-L-亮氨酸盐和3-氨基邻苯二甲酸。

2.根据权利要求1所述的方法，所述缓冲溶液为磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二铵或它们的混合磷酸盐溶液。

3.根据权利要求2所述的方法，所述磷酸盐为磷酸二氢钾。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，所述缓冲溶液的浓度为0.0001mol/L至1mol/L。

5.根据权利要求4所述的方法，所述缓冲溶液的浓度为0.001mol/L至0.1mol/L。

6.根据权利要求1所述的方法，所说的缓冲溶液用磷酸溶液调节pH为2.0至2.4。

7.根据权利要求1所述的方法，所述梯度洗脱方法为：0分钟，流动相A为95%～80%，流动相B为5%～20%；0分钟至8分钟，流动相A线性减少至80%～60%，流动相B线性增加至20%～40%；8分钟至40分钟，流动相A线性减少至20%～0%，流动相B线性增加至80%～100%；40分钟至50分钟，流动相A为20%～0%，流动相B为80%～100%；50分钟至53分钟，流动相A线性增加至95%～80%，流动相B线性减少至5%～20%；53分钟至60分钟，流动相A为95%～80%，流动相B为5%～20%；即50分钟后为平衡色谱柱，流动相A和流动相B均为体积百分比。

8.根据权利要求1所述的方法，还包含以下步骤：

a)供试品溶液的配制：取阿普斯特或含阿普斯特的制剂适量，加稀释剂溶解样品，并配制成每1ml含阿普斯特0.5至10mg的样品溶液作为供试品溶液；

b)对照溶液的配制：精密量取阿普斯特对照品适量，加稀释剂制成浓度为供试品溶液浓度0.1%～2.0%的溶液，作为对照溶液；

设置流动相的流速为0.8～1.2ml/min；设置检测波长为200nm至250nm；设置色谱柱的柱温为15°C至40°C；设置进样量为5µl至100µl；分别精密量取等体积的供试品溶液与对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，完成供试品溶液有关物质的分离测定；

其中，所述稀释剂为乙腈和水的混合溶液，乙腈与水的体积比为5：95～30：70。

9.根据权利要求8所述的方法，流动相的流速为1.0ml/min，检测波长为230nm，色谱柱的柱温为25℃，进样量为20µl，乙腈与水的体积比为20:80 。