[发明专利]一种采用液相色谱法测定阿普斯特及其制剂中杂质的方法

说明书

本发明公开了一种采用液相色谱法分离测定阿普斯特及制剂中杂质的方法，该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以缓冲溶液为流动相A，甲醇与乙腈的混合溶剂为流动相B，流动相采用梯度洗脱方法，测定阿普斯特及其制剂的杂质。该方法可以将阿普斯特与已知杂质和未知杂质进行有效分离和测定，专属性强，准确度高，操作简便，能有效控制阿普斯特及其制剂的质量。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及用液相色谱法测定阿普斯特及其制剂中杂质的方法。

背景技术

阿普斯特（Methylnaltrexone bromide）是一种磷酸二酯酶-4（PDE-4）的抑制剂，其分子式为C₂₂H₂₄N₂O₇S，其结构式见下式（a）化合物。

阿普斯特的化学名为：(S)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮。在合成该化合物的过程中，有几步重要的中间体和未知杂质可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，这些已知中间体和未知杂质以及产生的降解产物即为药物质量控制中通常所说的有关物质（即杂质）。对于阿普斯特的合成主要控制的已知杂质有八个，分别是：起始原料SM2，其结构式见下式（b）；中间体II，其结构式见下式（c）；中间体IV，其结构式见下式（d）；IP1，其结构式见下式（e）；IP8，其结构式见下式（f）；IP9，其结构式见下式（g）；IP10，其结构式见下式（h）；IP14，其结构式见下式（i）。其中，中间体Ⅱ即式（c）可通过商业途径购买；IP1、IP9、IP10和IP14已在Disposition,metabolism and mass balance of [¹⁴C]apremilast following oral administration；Xenobiotica, 2011; 41(12):1063–1075中公开。

可见，阿普斯特的相关物质较多，且结构类似，给分离带来难度，另外，各个杂质的极性各不相同，有极性差异较大的中间体IV和IP1，有极性相近的IP9和IP10、以及IP1和IP14，在满足阿普斯特与各个杂质分离的前提下，还要满足杂质与杂质之间的分离，这使检测增大了难度。采用常规的检测手段方法难以实现阿普斯特与杂质以及杂质与杂质之间的有效分离，这会影响阿普斯特及其制剂的质量控制。

为了准确地控制阿普斯特及制剂产品的质量，有必要研究一种能简单、快速、准确地分离检测出阿普斯特及其制剂有关物质的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用液相色谱法（HPLC）分离测定阿普斯特及其制剂中杂质的方法，该方法能有效实现阿普斯特与杂质、杂质与杂质之间的分离和测定，从而实现对阿普斯特及其制剂质量的有效控制。

这里所说的杂质是指从合成过程中引入的杂质或原料药或其制剂降解产生的杂质，包括起始原料等，还包括已知结构杂质和未知结构杂质。所述测定阿普斯特及其制剂中的杂质是指测定阿普斯特原料药和含有阿普斯特的制剂中的杂质或称为相关物质，所述已知结构的杂质包含：4-氨基-2-[1-（3-乙氧基-4-甲氧基苯基）-2-（甲基磺酰基）乙基]- 1H-异吲哚-1,3（2H）-二酮（简称IP1）、3-乙酰基邻苯二甲酸（简称IP8）、N-{2-[1-（3-乙氧基-4-羟基苯基）-2-（甲基磺酰基）乙基]-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基}乙酰胺（简称IP9）、N-{2-[1-（3-乙氧基-4-羟基苯基）-2-（甲基磺酰基）乙基]-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基}乙酰胺（简称IP10）、N-{2-[1-（3-乙氧基-4-甲氧基苯基）-2-（甲基磺酰基）乙基]-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基}-2-羟基乙酰胺（简称IP14）、3-硝基邻苯二甲酸（简称SM2）、（S）-1-（3-乙氧基-4-甲氧基苯基）-2-(甲基磺酰基)乙胺，N-乙酰基-L-亮氨酸盐（简称中间体II）或3-氨基邻苯二甲酸（简称中间体IV）。