[发明专利]一种恶臭假单胞菌检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫化学检测技术，尤其是涉及一种基于卵黄抗体的胶体金免疫层析技术用以快速检测环境、食品、人和动物各种组织，血液及粪便样品中恶臭假单胞菌的检测试纸条及其制备方法。

背景技术

假单胞菌属是微生物的重要类群，也是自然界分布最广泛的微生物之一。恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)属假单胞菌属(Pseudomonas)，假单胞菌科(Pseudomonadaceae)，为革兰氏阴性菌，广泛存在于土壤、海水、淡水动植物体表及各种含蛋白食品中，为人或动物源性或机会致病菌。目前，国内也陆续报道了一些由恶臭假单胞菌引起的养殖鱼类和甲壳动物的疾病，如欧洲鳗(Anguilla anguilla)的烂鳃病、大黄鱼(Pseudosciaena crocea)的肝肾白点病，罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)的黑鳃病及三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的牛奶病等，这些疾病一旦爆发，传播迅速，死亡率高，给养殖产业造成了巨大的损失。环境中的恶臭假单胞菌也可能随食物进入肠道，在一定条件下该菌异常增殖，破坏了肠道内正常菌群的平衡而造成鱼体发病，已经成为养殖鱼类的重要病原。同时恶臭假单胞菌也是人的条件致病菌，在一定条件下攻击机体免疫力低下人群，该菌感染人体自溶后释放出内毒素可致中毒症状，多系统感染，败血症，甚至感染性休克。恶臭假单胞菌为一种人畜共患病菌，近年来，随着广谱抗菌药物的广泛使用，恶臭假单胞菌的感染有上升趋势，且该菌对多种抗菌药物具有较高的耐药性，因此，若能确定病因，及时对症下药，势必能给养殖产业减少损失，同时，在医学方面也具有重要意义。

目前，病原体的检测方法主要有分离培养、电镜观察、PCR、ELISA、色谱分析等，这些方法多耗时耗力，需要专用场地和仪器设备，需要专业人员操作。对于恶臭假单胞菌感染，根据微生物检测标准需先对其进行增菌实验，挑选特定菌株用全自动微生物分析仪分析鉴定，整个过程操作繁琐，而且需要专业人员在无菌条件下进行，结果也需数天才能获得，不利于对病源的确定及病情的及时控制。

胶体金免疫层析试验(gold-immunochromatography assay GICA)是20世纪80年代开始发展起来的新的免疫分析方式，是应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，基于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术，它具有简便，快速，特异性强，灵敏度高，费用低等优点。依据胶体金免疫层析技术，在国内外无论人医应用方面，还是兽医应用方面，都已经研制出了多种胶体金免疫层析快速检测各种病原和有毒有害物质的试纸条。但是，目前国内外还没有公开任何关于恶臭假单胞菌检测试纸条及其制备方法的相关研究报道。

鸡卵黄抗体即卵黄中的免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk，IgY)，是针对特定抗原的，具有持续效价的高亲和力抗体。用鸡做宿主来产生抗特定抗原的IgY，饲养简单，无需采血，只需使用少量抗原即可产生大量抗体，从卵黄中提取的IgY纯度高、含量大。在疾病的检测、诊断方面，IgY因免疫学特性独特，动物种系发生学距离远，其特异性和针对性较哺乳动物抗体更强，应用于免疫诊断中，可减少假阳性的出现，从而提高检测的特异性，是近年来新兴的研究领域。但是，目前国内外还没有公开任何关于恶臭假单胞菌IgY的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于胶体金免疫层析技术的特异性强、灵敏度高、检测速度快、成本低并且操作简便的恶臭假单胞菌检测试纸条及其制备方法，满足了现场快速检测的需求。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种恶臭假单胞菌检测试纸条，所述的试纸条由PVC底板和在PVC底板上依次搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水垫；所述的结合垫上包被有抗恶臭假单胞菌卵黄抗体-胶体金标记物，所述的硝酸纤维素膜上分别设置有由恶臭假单胞菌超声波破碎液包被的检测线和由兔抗鸡卵黄抗体(IgY)包被的质控线。