[发明专利]一种棘白菌素B微生物酶转化方法

权利要求书

1.将棘白菌素B转化成棘白菌素B母核的方法，包括以下步骤：

1)、发酵能将棘白菌素B脱酰酶表达在胞外的基因工程菌，获得棘白菌素B脱酰酶；

2)、发酵完成后，将发酵液过滤或离心，得到上清液，向上清液中加入上清液体积的40％～80％(w/v)重量的非重金属盐，搅拌2～8小时，过滤或离心收集沉淀，得到粗酶；

3)、将棘白菌素B溶于甲醇、乙醇或二甲亚砜中，得到质量浓度为5～15％的棘白菌素B溶液；

4)、将步骤3)制备的棘白菌素B溶液和步骤2)制备的粗酶分别分批加入到磷酸盐缓冲液中，搅拌，使棘白菌素B转化为棘白菌素B母核，监测转化体系中棘白菌素B及棘白菌素B母核浓度，当棘白菌素B浓度不再减少，棘白菌素B母核浓度不再增加时，结束转化，

其中，步骤4)加入到磷酸盐缓冲溶液中的棘白菌素B的初始量为反应溶液体积的0.1％～0.4％(w/v)；加入到磷酸盐缓冲溶液中粗酶的初始量为转化反应溶液体积的1％～4％(w/v)。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2)所述的非重金属盐为硫酸铵。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤4)所述磷酸盐缓冲液浓度为0.05～0.15M。

4.如权利要求3所述方法，其特征在于，步骤4)所述磷酸盐缓冲溶液用盐酸调节pH至5.5～6.5。

5.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤4)分批添加粗酶次数为3～6次，每次间隔2～8小时，每次添加量为转化反应溶液体积的1％～4％(w/v)。

6.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤4)分批添加棘白菌素B溶液次数为2～5次，每次间隔2～8小时，每次添加量以棘白菌素B计算相当于转化反应溶液体积的0.1％～0.4％(w/v)。

7.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤4)转化过程中采用HPLC监测转化体系中棘白菌素B及棘白菌素B母核浓度。