[发明专利]试剂盒，其制备方法和应用

权利要求书

1.一种试剂盒，其特征在于包括：

试纸条，包括：

样本垫，用以向所述试纸条内摄入含有纳米金标记物的液体样品，

表面分布有彼此不重合的检测线和和质控线的检测垫，所述检测线包含仅在有目标物质存在时能与所述纳米金标记物及目标物质结合的识别物质，而所述质控线内包含在无目标物质存在时就能与所述纳米金标记物结合的参考物质，

所述样本垫与检测垫的边缘部相互接触或重合；

以及，纳米金标记物质，包含单分散的纳米金球以及结合在所述纳米金球上的、能与目标物质特异性结合的标记物，其中所述纳米金球具有与试纸条读取仪光源波长耦合的等离子光学波长。

2.一种大肠杆菌O157:H7检测试剂盒，其特征在于包含：

大肠杆菌O157:H7胶体金试纸条，包括：

样本垫，用以向所述试纸条内摄入添加有纳米金球标记大肠杆菌O157:H7单克隆抗体的液态待检测样品，

以及，表面分布有彼此不重合的检测线和和质控线的检测垫，所述检测线包含仅在有大肠杆菌O157:H7存在时能与所述纳米金球标记大肠杆菌O157:H7单克隆抗体及大肠杆菌O157:H7结合的第一抗体，而所述质控线内包含在无大肠杆菌O157:H7存在时就能与所述纳米金球标记大肠杆菌O157:H7单克隆抗体结合的第二抗体，

所述样本垫与检测垫的边缘部相互接触或重合；

以及，纳米金球标记大肠杆菌O157:H7单克隆抗体，包含单分散的纳米金球和标记在所述纳米金球上的大肠杆菌O157:H7单克隆抗体，其中所述纳米金球具有与试纸条读取仪光源波长耦合的等离子光学波长。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述试纸条包括依次分布于基板上的样本垫、检测垫和吸水垫，其中所述检测垫与吸水垫的边缘部相互接触或重合。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述单分散的纳米金球的粒子分散度PDI为0.20-0.65，优选为0.20，等离子光学波长为520-560cm^-1，粒径为18-60nm。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述第一抗体包括大肠杆菌O157:H7兔多抗，所述第二抗体包括驴抗鼠二抗。

6.根据权利要求2所述的大肠杆菌O157:H7胶体金试纸条，其特征在于所述检测垫采用硝酸纤维膜。

7.权利要求2-6中任一项所述试剂盒的制备方法，其特征在于包括：

纳米金球标记大肠杆菌O157:H7单克隆抗体的制备，包括：将HAuCl₄与柠檬酸三钠在水相反应体系中于100-150℃恒温回流，使反应溶液颜色从浅黄→浅紫色→浅红色→酒红色，获得粒子分散度PDI为0.20-0.65的、粒径为18-60nm、等离子光学波长为520-560cm^-1的纳米金球，再将所述纳米金球的分散液与大肠杆菌O157:H7单克隆抗体混合搅拌，并以BSA和PEG2000进行封闭，离心除去未标记的抗体，用复溶液复溶，备用；

胶体金试纸条的制备，包括：将样本垫、检测垫、吸水垫依次粘贴在基板上，并将第一抗体和第二抗体分别施加至检测垫上，形成检测线和和质控线。

8.一种大肠杆菌O157:H7检测方法，其特征在于包括：

提供权利要求2-6中任一项所述的试剂盒；

将所述纳米金球标记大肠杆菌O157:H7单克隆抗体加入液态的待检测样品并充分混合，再取混合物滴加至所述试纸条的样本垫上，待混合物在试纸条上充分扩散后，则：

观察试纸条颜色变化，而定性分析待检测样品中是否存在大肠杆菌O157:H7；

或者，以试纸条读取仪读取，记录T、C值和T/C值，并与标准曲线对照，定量检测待检测样品中大肠杆菌O157:H7的含量。

9.根据权利要求8所述大肠杆菌O157:H7检测方法，其特征在于该方法对于大肠杆菌O157:H7的检测限为10²CFU/mL。

10.一种检测系统，其特征在于包含权利要求1-6中任一项所述的试剂盒以及试纸条读取仪光源。