[发明专利]一种利用重组大肠杆菌生产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的方法

权利要求书

1.一种利用重组大肠杆菌生产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的方法，其中，利用重组大肠杆菌生产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺是通过将具有氨基酸酯酰基转移酶活性的蛋白质的基因片段重组到载体上并转入微生物细胞，得到的具有L-丙氨酰-L-谷氨酰胺生物合成活性的重组微生物。

2.权利要求1所述的利用重组大肠杆菌生产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的方法，其特征在于通过优化氨基酸酯酰基转移酶基因的密码子，并使重组微生物中的经密码子优化后的氨基酸酯酰基转移酶基因的拷贝数增加来实现。

3.权利要求2所述的重组微生物中的氨基酸酯酰基转移酶基因的拷贝数增加是通过将经密码子优化后的氨基酸酯酰基转移酶基因连接到多拷贝质粒中来实现的。

4.权利要求3所述的多拷贝质粒包括但不局限于pUC19、pKYP10等。

5.L-丙氨酰-L-谷氨酰的生产方法，其特征是将权利要求1、2、3所述的重组微生物在培养基上培养，将得到的培养物、菌体或者它们的处理物作为酶源，在一定pH值的水溶液中，作用于游离的L-谷氨酰胺和L-丙氨酸甲酯盐酸盐，生成L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，再从该水性介质中提取生成的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。

6.权利要求5所述的生产方法，其特征是水性介质是一定pH值的水溶液。

7.权利要求5所述的生产方法，其特征是向水性介质中添加L-谷氨酰胺和L-丙氨酸甲酯盐酸盐两个底物。

8.权利要求5所述的生产方法，其特征在于菌体培养和酶催化反应分两步进行。

9.权利要求1、2、3、5所述的重组微生物包括但不局限于大肠杆菌属、棒状杆菌属、假单胞菌属。