[发明专利]一种利用重组大肠杆菌发酵生产顺式-3-L-羟脯氨酸的方法

权利要求书

1.一株产顺式-3-L-羟脯氨酸的重组微生物的构建方法，其特征在于，优化并合成一种高效启动子和脯氨酸-3-羟化酶结构基因P3H，并将此高效启动子和结构基因P3H连接到质粒上，构建的重组质粒可大量表达脯氨酸-3-羟化酶，将此重组质粒转化到宿主微生物中，得到产顺式-3-L-羟脯氨酸的重组微生物。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述启动子可以为任何能在宿主微生物中控制基因表达的启动子。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述表达脯氨酸-3-羟化酶结构基因的质粒可以是任何能在宿主中自主复制并表达目的基因的载体。

4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述宿主包括但不限于大肠杆菌，可以为任何允许外源基因复制和表达的宿主微生物。

5.如权利要求1所述，其特征在于，脯氨酸-3-羟化酶结构基因的来源可以为任何能把游离L-脯氨酸转化为顺式-3-L-羟脯氨酸的有机体。

6.顺式-3-L-羟脯氨酸的生物合成方法，其特征是将权利要求1、2、3、4、5所述的重组微生物在培养基中培养，向培养基中添加2-酮戊二酸和亚铁离子，以得到的培养物、菌体或者它们的处理物作为酶源，催化L-脯氨酸转化为顺式-3-L-羟脯氨酸，再从该培养基中提取生成的顺式-3-L-羟脯氨酸。

7.如权利要求6所述的合成方法，其特征在于，培养基中的L-脯氨酸为外源添加物。