[发明专利]一种提高冬虫夏草多糖产量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种提高冬虫夏草多糖产量的方法。

背景技术

冬虫夏草又名中华虫草，是冬虫夏草菌寄生于高山草甸中的蝠蛾幼虫，使幼虫身躯僵化，即冬虫夏草菌的子实体与僵虫菌核构成的复合体，属于可食用的真菌。冬虫夏草是我国一种传统的名贵滋补中药材，有调节免疫系统功能、抗肿瘤、抗疲劳等多重功效。由于具有独特的药用价值，加上野生资源不断减少、市场价格飙升，冬虫夏草受到国内外各界人士的关注也成为近年科学研究的热点。

冬虫夏草中含量最高的活性物质是冬虫夏草多糖，因其可以抗氧化、抗肿瘤和增强免疫力等功效而受广大人群青睐。冬虫夏草多糖是由甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖、岩藻糖等组成的多聚糖。冬虫夏草多糖有固本培元、扶正祛邪的作用，能调节免疫、抗肿瘤、护肾、延缓衰老、抗疲劳、调节脂代谢与糖代谢、抗肝纤维化和抗辐射等多种功能，是值得挖掘的一大生物宝库。

发明内容：

本发明的目的是提供一种提高冬虫夏草多糖产量的方法。具体说是利用一株从西藏冬虫夏草子实体中分离的中国被毛孢(Hisutella sinensis)，利用特制培养基通过特殊的培养条件，发酵培养获得菌丝体。经检测发现冬虫夏草多糖含量高达13-14％，远高于野生冬虫夏草。

为了达成上述目的，本发明可通过如下技术措施实现：

一种提高冬虫夏草多糖产量的方法，采用中国被毛孢菌种M-010，已于2014年5月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，经鉴定该菌株为中国被毛孢(Hisutella sinensis)，保藏编号：CGMCC No.9046，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名:冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis。

包括如下步骤：

(1)菌种斜面培养 

培养基：马铃薯培养基；

挑取斜面培养的菌丝体一环，接种于新鲜斜面培养基，置于15-25℃恒温培养箱静置培养5-15天；

(2)菌种种子培养 

种子培养基：糖蜜2-6％、高F值寡肽0.2-1.0％、山药提取物0.5-1.0％，其余为水，pH自然。

挑取一环新鲜斜面生长的菌丝体，于液体种子培养基中，培养温度为15-25℃，培养转速为100-200rpm，培养周期5-10天；以5-15％(V/V)的接种量接种于二级种子罐，培养温度为15-25℃，培养转速为100-200rpm，通气量为1:0.1-0.5，培养周期4-7天；

(3)菌种发酵培养 

发酵培养基：糖蜜4-10％、高F值寡肽0.5-1.5％，其余为水，pH自然；

补料培养基：山药提取物1-3％。

按5-20％(V/V)接种量接种步骤(2)的种子罐菌液至发酵培养基中，培养转速为100-300rpm，通气量为1:0.2-0.7，于15-25℃条件下培养2天后，间歇搅拌(静止与搅拌交替进行),分3-10次流加共计0.1-0.3％(V/V)的补料培养基，培养周期为7-15天；

(4)抽滤 将步骤(3)发酵培养所得发酵液经板框过滤弃去滤液，获得湿菌丝体；

(5)烘干 将步骤(4)获得的湿菌丝体通过50-70℃烘干粉碎后得菌丝体粉。

本发明的目的还可通过如下技术措施实现：

步骤(3)所述间歇搅拌指每隔2-6h搅拌2-6h，如此循环；

所述冬虫夏草菌粉中多糖的提取方法为：取冬虫夏草菌粉，加入菌粉10倍数量体积的蒸馏水，沸水浴下反复浸提并合并滤液，浓缩至原体积的1/5，加入95％乙醇并低温沉淀过夜，离心取沉淀，然后用乙醇和丙酮分别洗涤，干燥后得粗多糖。

所述冬虫夏草多糖含量采用苯酚硫酸法测定。

本发明的有益效果：

(1)本发明特制的液体培养基，营养成分经济合理，培养方法简单，对设备无特殊要求，一般的发酵设备均可满足生产，为该菌株进一步开发利用奠定了基础。

(2)通过间歇搅拌工艺，降低了动力消耗，从而降低了生产成本。

(3)通过本发明培养方法获得的冬虫夏草菌粉，虫草多糖产量可达13-14％，较野生冬虫夏草中多糖含量提高62.5-75％。

具体实施方式