[发明专利]一种重组活性肽及其同步制备方法

权利要求书

1.一种重组活性肽，其特征在于：所述重组活性肽是由活性肽单体叠加或定向串联而成的，所述活性肽单体包括降血压肽单体和抗氧化肽单体，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1。

2.一种编码权利要求1所述的重组活性肽的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：2。

3.根据权利要求1所述的重组活性肽，其特征在于：所述的抗氧化肽单体有DTHK、YPIL、FLEPDY、YLEPFR、YLEPDY、YDEPEW、HYRPFW、YEPDY和IWAPFY；所述降血压肽单体有MRW、WIR、IRA、AMK、MKR、RGY、VAW、DGL、IPP、IKP、IKPFR、IKPVA、AKF、IW、VAF、VSV、IQY和IVY。

4.根据权利要求1所述的重组活性肽，其特征在于：所述活性肽单体部分肽段的N末端为胃蛋白酶酶切位点；所述活性肽单体部分肽段的C末端为胃蛋白酶或胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶酶切位点；所述重组降血压肽和抗氧化肽中部分活性肽单体之间由带有胃蛋白酶或胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶酶切位点的连接片段串联而成。

5.同步制备权利要求1所述的重组活性肽的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)人工合成序列表SEQ ID NO：2所示的基因；

(2)构建能高效表达与纯化重组降血压肽和抗氧化肽的表达载体；

(3)用所述表达载体转化宿主菌构建基因工程菌；

(4)利用所述工程菌表达重组活性肽；

(5)利用标签纯化及标签去除技术获取重组活性肽；

(6)采用胃蛋白酶和/或胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶酶解制得降血压肽和抗氧化肽。

6.根据权利要求5所述的重组降血压肽和抗氧化肽的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述表达载体为pET28a，宿主菌为大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。

7.根据权利要求6所述的重组活性肽的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，采用DNA重组技术，将序列表SEQ ID NO：2所示的基因插入pET28a的HindIII和XhoI位点中，并分别在基因的上游的NcoI和BamHI位点以及BamHI和HindIII位点克隆入类弹性蛋白纯化标签ELPs基因和SUMO融合标签基因，获得重组表达载体pET28a-ESA3。

8.根据权利要求6所述的重组活性肽的制备方法，其特征在于：在步骤(3)中，并转化E.coli BL21(DE3)，获得工程菌；

在步骤(4)中，利用IPTG诱导工程菌表达ELPS-SUMO-A3，收集菌体，超声破碎细胞，收集超声上清或包涵体沉淀；

在步骤(5)中，对于可溶表达的如序列表SEQ ID NO：1所示的目标蛋白直接进行标签技术纯化，而对包涵体表达的目标蛋白先进行变性与复性再进行标签技术纯化；通过ELPs标签纯化技术纯化融合蛋白以及采用SUMO蛋白酶裂解及加盐离心去除二联体融合标签ELPs-SUMO，获得重组活性肽；

在步骤(6)中，采用胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶酶解重组活性肽，超滤得小肽混合体，再脱盐去杂，冷冻干燥样品，质检制得活性肽。

9.按照权利要求1-8任一项所述的重组活性肽在制备治疗高血压药中的应用。