[发明专利]一种重组活性肽及其同步制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别涉及一种重组活性肽及其同步制备方法。

背景技术

生物活性肽一般蕴藏于母体蛋白序列内，并不具备生物活性，但通过体内或体外蛋白酶或食品加工处理被释放后即可在体内行使生理功能。目前，功能活性肽主要是通过酶法水解蛋白原料进行制备。目前已有不少酶解法制备降血压肽和抗氧化肽的专利报道。相对生物提取法、化学降解法和化学合成法，酶解法具有产品安全性高、生产条件温和，对蛋白质营养价值破坏小等优势。但是，目前国内市场上出现的相关活性肽产品基本上是以活性较低的复合肽产品形式出现，如大豆肽、玉米肽、胶原蛋白肽等，功能专一性不强，且产品活性有待进一步的提高。

目前已有大量“通过常规分离手段纯化高纯活性肽”的专利报道，尽管研究者们鉴定出的某些肽段显示出极强的生理活性，如IPP、VPP、IKW、LHP等降血压肽和YHY、PHH、YKY、YPPAK、HDHPVC等抗氧化肽，但由于蕴藏于母体蛋白序列中的有效活性肽段比例低，导致酶解后期的低产率和高分离成本，除了极少数活性肽段(IPP、VPP等)有产品问世外，大多数高活性功能肽并没有得到有效开发利用。

随着基因工程技术的发展，利用DNA重组技术，将表达活性肽的基因克隆到某些微生物或动物体内，通过生物体直接表达出所需肽类，可大大增加其产量和纯度。目前，有关“利用基因工程菌制备活性肽”的专利报道已呈逐年增多的趋势。尽管利用基因工程技术制备高活性短肽已取得了技术上的突破，但活性肽多聚体的基因设计、表达效率及下游分离工艺有待进一步的完善。

近年来，细胞生物学和分子生物学的研究表明人体内除了具有升压物质及系统外，尚具有许多内源性减压物质及系统，以维持血压的相对稳定。有研究证实降血压肽与抗氧化肽在体内具有不同的作用靶点、不同的干预系统及不同的作用机制，但对高血压及相关心血管疾病的预防与控制具有积极效应。许多研究发现，多种功效因子联合作用比单一组分具有更好的效果，即呈现协同作用，其作用可能源于具有不同作用机制的功效因子之间存在明显的互补作用或相互修复作用。因此，如果将降血压肽和抗氧化肽联合应用于心血管疾病的预防与 控制，将会起到良好的效果。已有不少研究报道了通过酶解法同步制备降血压肽与抗氧化肽的相关报道。但是，目前尚无“利用基因工程菌同步制备降血压肽和抗氧化肽”的报道。

目前，缺乏一种高体内活性、低成本的重组活性肽及其同步制备方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种高体内活性、低成本的重组活性肽及其同步制备方法。

本发明的技术方案如下：一种重组活性肽，所述重组活性肽是由活性肽单体叠加或定向串联而成的，所述活性肽单体包括降血压肽单体和抗氧化肽单体，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1。

本发明的一种编码所述的重组活性肽的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：2。

进一步地，所述的抗氧化肽单体有DTHK、YPIL、FLEPDY、YLEPFR、YLEPDY、YDEPEW、HYRPFW、Y EPDY和IWAPFY；所述降血压肽单体有MRW、WIR、IRA、AMK、MKR、RGY、VAW、DGL、IPP、IKP、IKPFR、IKPVA、AKF、IW、VAF、VSV、IQY和IVY。

进一步地，所述活性肽单体部分肽段的N末端为胃蛋白酶酶切位点；所述活性肽单体部分肽段的C末端为胃蛋白酶或胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶酶切位点；所述重组降血压肽和抗氧化肽中部分活性肽单体之间由带有胃蛋白酶或胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶酶切位点的连接片段串联而成。

本发明同步制备所述的重组活性肽的方法，包括如下步骤：

(1)人工合成序列表SEQ ID NO：2所示的基因；

(2)构建能高效表达与纯化重组降血压肽和抗氧化肽的表达载体；

(3)用所述表达载体转化宿主菌构建基因工程菌；

(4)利用所述工程菌表达重组活性肽；

(5)利用标签纯化及标签去除技术获取重组活性肽；

(6)采用胃蛋白酶和/或胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶酶解制得降血压肽和抗氧化肽。

进一步地，在步骤(2)中，所述表达载体为pET28a，宿主菌为大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。