[发明专利]一种低粘度、高纯度酵母甘露聚糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及酵母甘露聚糖的制备，具体地说，涉及一种低粘度、高纯度酵母甘露聚糖的制备方法。

背景技术

酵母甘露聚糖是酵母细胞壁多糖的一种，约占酵母细胞壁干重的40％，由主链和侧链构成，主链由多个甘露糖分子以α-1,6键连接形成，主链上连接有以α-1,2或α-1,3键连接的甘露糖侧链，它通过O-糖肽键和N-糖肽键与蛋白质连在一起，由5％～20％蛋白质、80％～90％的甘露糖组成其分子质量约为20KDa～200KDa。甘露聚糖具有多种免疫学功能，可以调节肠道菌群平衡、增强免疫、结合或者吸附霉菌毒素、抗氧化等，具有广阔的应用前景。

酵母甘露聚糖在酵母细胞壁中以共价键形式与蛋白质相连，粗提取得到的甘露聚糖含有较多的蛋白质，纯度较低，采用适当的方法降低蛋白质含量是制备高纯度酵母甘露聚糖的关键，目前，除蛋白的方法主要有：Sevage法、三氯乙酸法和氯化钙法等，然而，这些方法存在如下问题：蛋白去除率高而多糖保留率低、有机溶剂引入和残留、水相体系不适用，不利于酵母甘露聚糖纯度的提升。

国内市场的酵母甘露聚糖主要为含量20％～50％的规格，价格较低，且低纯度限制了酵母甘露聚糖的广泛应用，因此，研究开发一种提高酵母甘露聚糖纯度的方法，对于提高酵母甘露聚糖产品附加值，满足市场需求具有重要的经济效益和社会效益。

多糖溶液的流变特性对于被应用的食品来说至关重要，会直接影响到该食品的感官品质，所以在开发食品要选择一种胶体时，该胶体的流变特性是需要首先考虑的因素。不同纯度的酵母甘露聚糖，其粘度差别较大，对应用体系的影响不同，如何做到不改变体系流变学性质，而又能够发挥酵母甘露聚糖的功能特性就显得至关重要。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种高纯度酵母甘露聚糖的制备方法。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

一种低粘度、高纯度酵母甘露聚糖的制备方法，以酿酒酵母细胞壁为原料，采用水提醇沉法，得到粗品酵母甘露聚糖，先经中性蛋白酶酶解，并在磷酸缓冲液保护下，进行链霉蛋白酶酶解并多次离心，再加工即得。

本发明技术方案所得的低粘度、高纯度酵母甘露聚糖产品为白色松软的棉絮状固形物。

进一步地，所述制备方法具体包括如下步骤：

(1)以酿酒酵母细胞壁为原料，采用水提醇沉法，得到粗品酵母甘露聚糖Ⅰ(纯度在80％以下)；

(2)采用去离子水，将步骤(1)所得粗品酵母甘露聚糖配制成溶液；

(3)向步骤(2)所得溶液中加入中性蛋白酶neutrase，进行酶解，酶解结束后，进行灭酶，得粗品酵母甘露聚糖的一次酶解液；

(4)将步骤(3)所得的一次酶解液进行离心处理；

(5)取步骤(4)所得上清，加入乙醇进行醇沉，离心收集沉淀，得粗品酵母甘露聚糖Ⅱ；

(6)取步骤(5)所得沉淀，加入磷酸盐缓冲液配制成溶液，采用NaOH调节溶液pH值至7.5～8.0；

(7)取步骤(6)所得溶液，加入链霉蛋白酶，进行酶解，酶解结束后，进行灭酶，得粗品酵母甘露聚糖的二次酶解液；

(8)将步骤(7)所得二次酶解液进行离心处理；

(9)取步骤(8)所得上清，加入乙醇进行醇沉，离心收集沉淀；

(10)将步骤(9)所得沉淀采用去离子溶解，搅拌均匀至分散完全，将所述溶液采用超滤除盐，收集所得截留液；

(11)将步骤(10)所得的截留液进行喷雾干燥，即得低粘度、高纯度酵母甘露聚糖Ⅲ。

其中，所述步骤(1)中，采用热水浸提法提取粗品酵母甘露聚糖。

其中，所述步骤(2)中，采用去离子水，将步骤(1)所得粗品酵母甘露聚糖配制成15％w/v的溶液。

其中，所述步骤(3)中，中性蛋白酶的添加量为粗品酵母甘露聚糖中蛋白含量的0.05％，酶解温度为45℃，酶解时间为2h。

其中，所述步骤(4)中，离心转速为4000～5000rpm，离心时间为5～10min。

其中，所述步骤(5)中，乙醇的用量为所得上清的二倍体积，离心转速为4000～5000rpm，离心时间为10～20min。

其中，所述步骤(6)中，所述溶液浓度为15％w/v，磷酸盐缓冲液的浓度为0.02M～0.2M，pH为7.0；NaOH浓度为0.01M。

其中，所述步骤(7)中，链霉蛋白酶的添加量为粗品酵母甘露聚糖中蛋白含量的0.05％，酶解温度为40℃，酶解时间为8h。