[发明专利]检测人ApoE‑ε4蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种用于定量检测待测物中人ApoE-ε4蛋白的荧光免疫层析试纸，该试纸通过双抗体夹心法检测所述人ApoE-ε4蛋白，其中：

所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一ApoE-ε4单克隆抗体作为捕获抗体，所述第一ApoE-ε4单克隆抗体来源于人ApoE-ε4抗原表位肽(1)和(2)中的一者；并且

所述双抗体夹心法采用第二ApoE-ε4单克隆抗体作为检测抗体，所述第二ApoE-ε4单克隆抗体来源于人ApoE-ε4抗原表位肽(1)和(2)中的另一者；

所述人ApoE-ε4抗原表位肽(1)和(2)分别为：

(1)Tyr-Lys-Val-Glu-Gln-Ala-Val-Glu-Thr-Glu-Pro-Glu-Pro-Glu-Leu-Arg；

(2)Tyr-Ser-Arg-Thr-Arg-Asp-Arg-Leu-Asp-Glu-Val-Lys-Glu-Gln-Val-Ala-Glu-Val-Arg-Ala-Lys。

2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述第一ApoE-ε4单克隆抗体是由第一ApoE-ε4抗原制备而成的，该第一ApoE-ε4抗原是通过使所述人ApoE-ε4抗原表位肽(1)和(2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成的；并且

所述第二ApoE-ε4单克隆抗体是由第二ApoE-ε4抗原制备而成的，该第二ApoE-ε4抗原是通过使所述人ApoE-ε4抗原表位肽(1)和(2)中的另一者与载体蛋白偶联制备而成的。

3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微球的粒径为320nm至400nm。

4.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微球上的荧光物质为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明或X-罗丹明；所述荧光微球的微球材料为聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、或由甲基丙烯酸甲酯与其它单体共聚形成的共聚物。

5.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微球的激发波长为350～600nm；发射波长为500～700nm。

6.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述试纸具有底板，并且在该底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置有：样品垫、结合垫、反应膜、吸水滤纸，所述结合垫设置有所述的标记有荧光微球的第一ApoE-ε4单克隆抗体，所述反应膜包括检测区和质控区，所述检测区包被有所述第二ApoE-ε4单克隆抗体，所述质控区包被有能与所述的标记有荧光微球的第一ApoE-ε4单克隆抗体特异性结合的抗抗体。

7.根据权利要求6所述的荧光免疫层析试纸，其中所述反应膜为在大于550nm的波长下基本上不发荧光的硝酸纤维素膜。

8.根据权利要求6所述的荧光免疫层析试纸，其中所述底板基本上不具有荧光性质。

9.根据权利要求6所述的荧光免疫层析试纸，其中所述抗抗体为羊抗鼠IgG单克隆抗体或兔抗鼠IgG单克隆抗体。

10.根据权利要求4所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微球上的荧光物质为X-罗丹明。

11.根据权利要求5所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微球的激发波长为390nm；发射波长为615nm。

12.根据权利要求9所述的荧光免疫层析试纸，其中所述抗抗体为羊抗鼠IgG单克隆抗体。

13.一种制备根据权利要求1至12中任意一项所述的荧光免疫层析试纸的方法，其包括以下步骤：

1)提供标记有荧光微球的第一ApoE-ε4单克隆抗体；

2)提供结合垫，其中在所述结合垫上包被所述的标记有荧光微球的第一ApoE-ε4单克隆抗体；

3)提供反应膜，其中在所述反应膜上沿使用时的层析方向间隔固定第二ApoE-ε4单克隆抗体和抗抗体，以分别形成检测区和质控区；和

4)在底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置样品垫、所述结合垫、所述反应膜、吸水滤纸，从而制成所述荧光免疫层析试纸。