[发明专利]H5N1型禽流感病毒的NS1-C端截短蛋白、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种H5N1型禽流感病毒的NS1-C端截短蛋白，其特征在于：其具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸。

2.一种编码权利要求1所述NS1-C端截短蛋白的基因，其特征在于：其具有SEQ ID NO.2所示的序列。

3.一种含有权利要求1所述NS1-C端截短蛋白或权利要求2所述基因的重组表达载体。

4.按照权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于：其为将SEQ ID NO.2所示序列的核苷酸连入pEGFP-N1载体的EcoRI和BamHI酶切位点而得。

5.一种含有权利要求4所述重组表达载体的工程菌。

6.一种权利要求3或4所述重组表达载体的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

1)使用同源建模软件以禽流感病毒菌株的NS1蛋白晶体结构为模板，构建目标禽流感病毒NS1-C端区域空间结构；

2)在选定的NS1-C端区域上下游分别引入EcoRI和BamHI酶切位点，设计截短体引物，进行截短体PCR扩增；

3)将PCR产物纯化后与pEGFP-N1载体分别进行双酶切，回收酶切产物进行连接；

4)将连接产物转化至大肠杆菌DH5α；

5)取转化平板上的阳性菌落，转接LB液体培养基中，37℃过夜培养，用试剂盒进行质粒的提取；

6)通过双酶切和测序鉴定，得到阳性重组质粒。

7.按照权利要求6所述重组表达载体的制备方法，其特征在于，所述截短体引物具体为：

正向引物F1:5’-ccggaattctaatgtcatcggaggacttgaatgg-3’

反向引物R1:5’-cggggatcccgaacttttgactcaattgttctc-3’。

8.按照权利要求6所述重组表达载体的制备方法，其特征在于：所述禽流感病毒菌株为A/chicken/Hubei/327/2004(H5N1)菌株。

9.一种权利要求1所述NS1-C端截短蛋白或权利要求2所述基因或权利要求3、4所述重组表达载体在流感病毒治疗药物中的应用。