[发明专利]一种pTerm-SC质粒及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种pTerm-SC质粒，其特征在于，所述质粒包括repE基因、sopA基因、sopB基因、sopC基因、ori2复制子、oriⅤ复制子、抗生素抗性基因以及原核生物转录终止子；所述原核生物转录终止子为至少两个不依赖ρ因子的原核生物转录终止子；所述原核生物转录终止子设置于多克隆位点的两端。

2.根据权利要求1所述的pTerm-SC质粒，其特征在于，所述抗生素抗性基因为编码氯霉素乙酰转移酶的Cm基因。

3.根据权利要求1或2所述的一种pTerm-SC质粒，其特征在于，所述质粒的拷贝数为7-10个。

4.根据权利要求1-3任一所述的pTerm-SC质粒，其特征在于，所述质粒具有如SEQ ID NO.5所示的DNA序列，所述质粒中，自5’端第4366bp-5540bp为sopA基因，5541bp-6512bp为sopB基因，6608bp-7062bp为sopC基因，542bp-1201bp为Cm基因，2438bp-3193bp为repE基因，1573bp-2079bp为oriⅤ复制子，2135bp-2344bp为ori2复制子，1bp-412bp及3608bp-4201bp为转录终止子区域，3915bp-3956bp为多克隆位点。

5.一种构建权利要求1-4任一所述的pTerm-SC质粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：分别设计并人工合成具有SEQ ID NO.1所示序列结构的SopA-SopB基因片段、具有SEQ ID NO.2所示序列结构的SopC-原核生物转录终止子基因片段、具有SEQ ID NO.3所示序列结构的Cm-oriⅤ-ori2基因片段以及具有SEQ ID NO.4所示序列结构的repE-原核生物转录终止子基因片段；

步骤二：运用多段重组法将所述SopA-SopB基因片段、SopC-原核生物转录终止子基因片段、Cm-oriⅤ-ori2基因片段、repE-原核生物转录终止子基因片段连接环化，最终得到环形的质粒。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述SopA-SopB基因片段、SopC-原核生物转录终止子基因片段、Cm-oriⅤ-ori2基因片段、repE-原核生物转录终止子基因片段之间具有30bp的重叠互补区。

7.根据权利要求5或6所述的构建方法，其特征在于，所述多段重组法为Gibson重组方法，按1:1:1:1的摩尔比取所述SopA-SopB基因片段、SopC-原核生物转录终止子基因片段、Cm-oriⅤ-ori2基因片段、repE-原核生物转录终止子基因片段，加入灭菌去离子水及Gibson Assembly Master Mix试剂，50℃下反应至得到环形质粒。

8.根据权利要求5-7任一所述方法构建得到的pTerm-SC质粒。

9.权利要求1-4任一或8所述pTerm-SC质粒在基因克隆、筛选和测序领域中的应用。