[发明专利]谷子白发病菌LAMP快速检测方法的建立

权利要求书

1.一种谷子白发病菌的LAMP快速检测方法，其特征在于该检测方法包括以下步骤： 

（1）根据谷子白发病菌的18S rDNA序列设计LAMP特异性引物；

（2）LAMP扩增及扩增产物的检测；

（3）LAMP引物的特异性检测；

（4）LAMP扩增和PCR扩增灵敏性比较；

（5）谷子种子携带白发病菌的检测。

2.根据权利要求1所述的谷子白发病菌的LAMP快速检测方法，其特征在于：所述的LAMP特异性引物序列如下：

F3：GCGTGCGTGTACTATGGC

B3：GTTGTAGGCACCTCAGTCC

FIP：GGCGTCCCACCACAATACAGGCTTTTTGGCTGCGCTTGG

BIP：ACCGCGGGAAATGACTACCGAAACCACAACTACTCGTCCAC 。

3.根据权利要求1所述的谷子白发病菌的LAMP快速检测方法，其特征在于：所述的LAMP反应体系为：25.0μL，其中，外引物F3和B3（10μM）各0.5μL，内引物FIP和BIP（10μM）各4.0μL，dNTP（10mmol/L）4.0μL，甜菜碱（5mmol/L）1.0μL，Bst DNA聚合酶（8U/μL）1.0μL，10×DNA聚合酶buffer 2.5μL，DNA模板1.0μL，dH₂O（灭菌蒸馏水）6.5μL；扩增条件为65℃条件下温育60min，80℃下反应10min。

4.根据权利要求1所述的谷子白发病菌的LAMP快速检测方法，其特征在于：所述的LAMP扩增产物的检测方法为琼脂糖凝胶电泳法和SYBR GreenⅠ荧光染料显色法；所述琼脂糖凝胶电泳法：取5μL LAMP扩增产物，用1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测，EB染色，在凝胶成像系统中观察，出现特征性梯状条带为阳性，未出现条带为阴性；SYBR GreenⅠ荧光染料显色法：向LAMP扩增产物中加入1μL 100×SYBR GreenⅠ，混匀后肉眼观察颜色变化，产生绿色为阳性反应，橙色则为阴性反应。