[发明专利]抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法

权利要求书

1.抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法，包括在有氧条件下，在含有碳源、氮源及无机组分的无菌发酵培养基中培养哈茨木霉(Trichoderma harzianum)ACCC30371，其特征在于培养过程还包括如下步骤：

发酵培养基采用如下质量百分含量的组分组成：

蔗糖6％-8％，氯化钾0.04％-0.06％，硝酸钠0.6％-0.8％，磷酸氢二钾0.04％-0.06％，硫酸镁0.04％-0.06％，磷酸二氢钾0.04％-0.06％，消泡剂≤0.01％，余量为水；

发酵的条件是：

装料系数65％-75％，培养温度为26℃-28℃，搅拌速度为240转/分，通风量为1：0.3vvm，罐压为0.5公斤/厘米²，接种量为0.08％-0.1％，培养时间为68-72小时；

将发酵制备的发酵液过滤、浓缩，将浓缩液与过滤得到的菌丝混合后制成微生物制剂。

2.根据权利要求1所述的抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法，其特征在于消泡剂选用聚醚类消泡剂。

3.根据权利要求1所述的抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法，其特征在于浓缩液与过滤后的菌丝按照质量比为1:5的比例混合。

4.根据权利要求1或3中任一项所述的抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法，其特征在于所述的过滤采用板框压滤，浓缩采用中空纤维柱。

5.根据权利要求1所述的抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法，其特征在于还包括如下工艺步骤：将哈茨木霉ACCC30371扩大培养后制成摇瓶种子，将摇瓶种子接种至无菌发酵培养基进行通气培养。

6.根据权利要求5所述的抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法，其特征在于所述的扩大培养是将斜面菌种经扩大培养制成米孢子，将米孢子扩大培养制成摇瓶种子。

7.根据权利要求6所述的所述的抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法，其特征在于所述的斜面培养基采用如下质量百分含量的组分组成：

葡萄糖4％-6％；硝酸钠0.1％-0.3％,硫酸镁0.04％-0.06％,磷酸氢二钾0.05％-0.15％,氯化钾0.04％-0.06％,硫酸铁0.0005％-0.0015％,琼脂2％-2.5％，余量为水；

斜面菌种的培养条件如下：

温度为26℃-28℃，培养时间7-8天。

8.根据权利要求6或7中任一项所述的所述的抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法，其特征在于所述的将斜面菌种经扩大培养制成米孢子包括如下工艺步骤：

米孢子培养基的制备方法如下：

将新鲜小米用清水洗净盛于浅盘中，加入占小米质量百分含量为75％-85％的水，置沸水锅中蒸至水分吸干，取出晾散；

取小米质量三分之一的新鲜麸皮，加入占麸皮质量95％-105％的水拌匀，与蒸好的小米混配均匀制成米孢子培养基；

将上述米孢子培养基分装入1000毫升三角瓶中，每瓶装55-65克；

将斜面菌种中的孢子用无菌水洗下后分别接种于3-6支三角瓶中，或者用接种铲接种；

培养条件如下：

温度为26℃-28℃，培养时间7-8天，每天摇瓶一次，使三角瓶中的培养物料不结块。