[发明专利]抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物发酵，特别是指一种抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法。

背景技术

棉花立枯病是棉花苗期的主要病害之一，其病原菌为立枯丝核菌(Rhizo ctonia solani),立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)是一种严重为害农作物的土传病原菌，可引起稻麦棉和多种蔬菜瓜果等的病害，一般用化学农药防治。但化学农药对环境的污染问题至今很难有效地解决。生物方法进行防治既能达到防治植物病害的作用，又几乎不存在环境污染的问题，是当前大力提倡和发展的防治方法。立枯丝核菌的胞壁中含有几丁质，利用抗生菌产的几丁质酶的特点可以抑制真菌生长,在防治植物病虫害等方面有非常重要的作用和意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法，采用该方法所制备的微生物制剂能有效抑制立枯丝核菌菌丝生长和菌核萌发，降低棉花立枯病的发病率。

本发明的整体技术构思是：

抑制立枯丝核菌的微生物制剂的制备方法，包括在有氧条件下，在含有碳源、氮源及无机组分的无菌发酵培养基中培养哈茨木霉(Trichoderma harzianum)ACCC30371，培养过程还包括如下步骤：

发酵培养基采用如下质量百分含量的组分组成：

蔗糖6％-8％，氯化钾0.04％-0.06％，硝酸钠0.6％-0.8％，磷酸氢二钾0.04％-0.06％，硫酸镁0.04％-0.06％，磷酸二氢钾0.04％-0.06％，消泡剂≤0.01％，余量为水；

发酵的条件是：

装料系数65-75％，培养温度为26-28℃，搅拌速度为240转/分，通风量为1：0.3vvm，罐压为0.5公斤/厘米²，接种量为0.08-0.1％，培养时间为68-72小时；

将发酵制备的发酵液过滤、浓缩，将浓缩液与过滤得到的菌丝混合后制成微生物制剂。

本发明的具体技术内容还有：

消泡剂优选采用聚醚类消泡剂。

为进一步提高抑菌效果，优选的技术方案是，浓缩液与过滤后的菌丝按照质量比为1:5的比例混合。

所述的过滤采用板框压滤，浓缩采用中空纤维柱。

为缩短发酵周期，常见且优选的技术实现方式是，将哈茨木霉ACCC30371扩大培养后制成摇瓶种子，将摇瓶种子接种至无菌发酵培养基进行通气培养。

更为优选的技术实现方式如下：所述的扩大培养是将斜面菌种经扩大培养制成米孢子，将米孢子扩大培养制成摇瓶种子。

所述的斜面培养基采用如下质量百分含量的组分组成：

葡萄糖4％-6％；硝酸钠0.1％-0.3％,硫酸镁0.04％-0.06％,磷酸氢二钾0.05％-0.15％,氯化钾0.04％-0.06％,硫酸铁0.0005％-0.0015％,琼脂2％-2.5％，余量为水；

斜面菌种的培养条件如下：

温度为26-28℃，培养时间7-8天。

所述的将斜面菌种经扩大培养制成米孢子包括如下工艺步骤：

米孢子培养基的制备方法如下：

将新鲜小米用清水洗净盛于浅盘中，加入占小米质量百分含量为75％-85％的水，置沸水锅中蒸至水分吸干，取出晾散；

取小米质量三分之一的新鲜麸皮，加入占麸皮质量95％-105％的水拌匀，与蒸好的小米混配均匀制成米孢子培养基；

将上述米孢子培养基分装入1000毫升三角瓶中，每瓶装55-65克；

将斜面菌种中的孢子用无菌水洗下后分别接种于3-6支三角瓶中，或者用接种铲接种；

培养条件如下：

温度为26-28℃，培养时间7-8天，每天摇瓶一次，使三角瓶中的培养物料不结块。

本发明所取得的实质性特点和显著的技术进步在于：

申请人经过对发酵条件及培养基组成进行科学的选配，所制备的微生物制剂对立枯丝核菌菌丝生长抑制率达88.1％，菌核萌发抑制率为77％，盆栽试验用发酵液原液施用防病效果可达70％。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步描述，但不作为对本发明的限定，本发明的保护范围以权利要求记载的内容为准，任何依据说明书做出的等效技术手段替换，均不脱离本发明的保护范围。

实施例1