[发明专利]一种饲料用纤维植物产品中粗蛋白含量的测定方法

权利要求书

1.一种饲料用纤维植物产品中粗蛋白含量的测定方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)试剂配制：

配制浓硫酸-双氧水混合液：由质量分数为98％的浓硫酸与质量分数为30％的双氧水混合而成，浓硫酸与双氧水的体积比为5∶3；

配制乙酸钠-乙酸缓冲溶液：量取60mL物质的量浓度为0.5mol/L的乙酸钠溶液与40mL物质的量浓度为0.5mol/L的乙酸溶液混合，该溶液pH 4.9；

配制显色剂：30mL质量浓度为37％的甲醛溶液与15mL乙酰丙酮混合，加水稀释至100mL，振荡混匀，室温下放置72h以上；

配制氨氮标准储备溶液：称取硫酸铵0.4720g加水溶解后移于100mL容量瓶中，加水溶解并定容至100mI即得，得到以氮计1000μg/mL氨氮标准储备溶液；

配制氨氮标准使用溶液：上述氨氮标准储备溶液稀释20倍得到以氮计50μg/mL的氨氮标准使用溶液；

(2)试样消解：取饲料用纤维植物样品，粉碎至细度0.25mm，准确称取粉碎的试样0.2000g～0.3000g，置于100mL消化管中，加入浓硫酸-双氧水混合液5mL～10mL，盖上透气磨口塞后充分摇匀，放入消化炉加热消化，待消化管中消化液呈清亮透明为止，然后加3～5滴双氧水后重新放入消化炉加热消化直至消化液呈清亮透明，取下已消化好试样的消化管，待冷却后，将消化液移入100mL容量瓶定容，为试样消化液，备用；同时做空白试验，得空白消化液；全程消化时间小于30min；

(3)试样溶液与空白试样液的制备：吸取2.00mL～5.00mL试样或试剂空白消化液于100mL容量瓶内，用水稀释至刻度，混匀；

(4)标准曲线的绘制：

分别吸取0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL的氨氮标准使用溶液，分别置于50mL容量瓶中，加10.0mL乙酸钠-乙酸缓冲溶液及10.0mL显色剂，加水定容至50mL，混匀，得到0.50、1.00、2.00、4.00、6.00μg/mL的5个质量浓度级别的标准工作溶液和1个试剂空白液；将标准工作溶液及试剂空白液置于100℃水浴中加热10min～15min，取出，用水冷却至室温后，移入1cm比色杯内，以试剂空白液为参比，于波长425nm处测量吸光度值；以氮的质量浓度为纵坐标，相应吸光度值为横坐标，绘制标准工作曲线；经拟合得到标准曲线方程：ρ(μg/mL)＝-0.059+8.569A，相关决定系数R²＝0.9997；

(5)试样测定：

吸取2.00mL～5.00mL试样溶液于50mL容量中；按步骤(4)操作，试样吸光度值与标准曲线代入步骤(6)中线性回归方程求出质量浓度ρ(μg/mL)；

(6)结果计算：

粗蛋白含量以质量分数w计，数值以百分率(％)表示，按下列公式进行计算：

w=ρv1m×v3v2×v5v4×104×F]]>

式中：

ρ-试样测定显色液质量浓度，单位为微克(μg/mL)；

v₁-试样显色液定容体积，单位为毫升(mL)；

v₃-制备试样溶液的消化液体积，单位为毫升(mL)；

v₂-消化液定容体积，单位为毫升(mL)；

v₄-试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；

v₅-测定用试样溶液体积，单位为毫升(mL)；

m-试样质量，单位为克(g)；

F-氮换算为粗蛋白的系数，纤维植物产品试样F为6.25。