[发明专利]一种饲料用纤维植物产品中粗蛋白含量的测定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及分析测定方法，具体涉及一种饲料用纤维植物产品中粗蛋白含量的测定方法。

背景技术

饲料是畜牧养殖生产中的重要生产资料，饲料中蛋白质含量是判定饲料营养价值的一项重要指标，粗蛋白是各种含氮物质的总称，它包括真蛋白质和含氮的非蛋白物质如氨基酸、酰胺等，它是构成细胞、血液、骨骼、肌肉各种器官组织的主要成分，对动物生长、发育、繁殖及各种器官的修补都是必需的，是生命活动必需的基础养分，它是其它养分不能代替的，是饲料产品中一个很重要的品质评价指标。

测定饲料用产品粗蛋白含量一般通过测出试样总氮量，根据试样种类再乘以相应系数来求得粗蛋白含量(由氮换算为蛋白质的结果称为粗蛋白质)。目前最常用测定饲料产品粗蛋白含量方法有凯氏定氮或扩散定氮法，所用仪器或器具为凯氏定氮仪、微量滴定管、扩散皿及价格较高的全自动定氮仪等，但实质上都是容量滴定法，存在操作繁琐、滴定误差较大、试剂用量较多、检测成本偏高，难以快速准确检测试样粗蛋白含量等缺陷。公布号为CN103048417A的中国专利公开了一种饲料中真蛋白的测定方法，其中根据试样含氮量称取试样，使含氮量控制在5～80mg，准确至0.0002克，放入离心管中，加40毫升75％乙醇溶液于室温下浸提1小时，浸提过程中每隔10分钟用玻璃棒搅动1次，浸提结束后离心，倒掉上清液，再用40毫升75％乙醇洗一次，再离心，倒掉上清液，再用40毫升75％乙醇洗一次，离心，倒掉上清液，最后把沉淀转入平皿中于105℃干燥恒重，将恒重的样品加入到定氮瓶中，按照GB/T6432-1994测定蛋白含量，测定结果即为真蛋白含量。公布号为CN103063507A的中国专利公开了一种测定饲料粗蛋白的快速消煮方法，其中根据试样含氮量称取试样，使含氮量控制在5～80mg，准确至0.0002克，放入250ml凯氏定氮瓶中，并称取2克混合催化剂，放入定氮瓶中，吸取12ml浓硫酸加到定氮瓶内并放入2粒玻璃珠，同时在定氮瓶口放上一个漏斗，在电炉上小火加热，加热时尽量避免泡沫飞溅，待泡沫停止发生后，加强火使其沸腾，直到溶液呈现透明的蓝绿色后，再继续消化1小时即可。实践中发现，上述两种资料中蛋白含量测定方法测定误差大，仍不满足快速、准确测定饲料用纤维植物产品中蛋白含量尤其是粗蛋白含量的需要。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种饲料用纤维植物产品中粗蛋白含量的测定方法，该测定方法快速方便，操作简单，结果准确，误差小，符合社会需求。

为实现上述目的，本发明的一种饲料用纤维植物产品中粗蛋白含量的测定方法采用如下技术方案：

一种饲料用纤维植物产品中粗蛋白含量的测定方法，包含以下步骤：

(1)试剂配制：

配制浓硫酸-双氧水混合液：由质量分数为98％的浓硫酸与质量分数为30％的双氧水混合而成，浓硫酸与双氧水的体积比为5∶3；

配制乙酸钠-乙酸缓冲溶液：量取60mL物质的量浓度为0.5mol/L的乙酸钠溶液与40mL物质的量浓度为0.5mol/L的乙酸溶液混合，该溶液pH4.9；

配制显色剂：30mL质量浓度为37％的甲醛溶液与15mL乙酰丙酮混合，加水稀释至100mL，振荡混匀，室温下放置72h以上；

配制氨氮标准储备溶液：称取硫酸铵0.4720g加水溶解后移于100mL容量瓶中，加水溶解并定容至100mL即得，得到以氮计1000μg/mL氨氮标准储备溶液；

配制氨氮标准使用溶液：上述氨氮标准储备溶液稀释20倍得到以氮计50μg/mL的氨氮标准使用溶液；

(2)试样消解：取饲料用纤维植物样品，粉碎至细度0.25mm，准确称取粉碎的试样0.2000g～0.3000g，置于100mL消化管中，加入浓硫酸-双氧水混合液5mL～10mL，盖上透气磨口塞后充分摇匀，放入消化炉加热消化，待消化管中消化液呈清亮透明为止，然后加3～5滴双氧水后重新放入消化炉加热消化直至消化液呈清亮透明，取下已消化好试样的消化管，待冷却后，将消化液移入100mL容量瓶定容，为试样消化液，备用；同时做空白试验，得空白消化液；全程消化时间小于30min；

(3)试样溶液与空白试样液的制备：吸取2.00mL～5.00mL试样或试剂空白消化液于100mL容量瓶内，用水稀释至刻度，混匀；

(4)标准曲线的绘制：