[发明专利]一种单胺氧化酶抑制剂的制备方法

权利要求书

1.一种单胺氧化酶抑制剂的制备方法，其包括下述步骤：

(1)用乙醇沉淀乳杆菌(Lactobacillus)的发酵液，取上清液；

(2)在上清液中加入水和乙酸乙酯进行萃取，将乙酸乙酯相提取液蒸发除去溶剂得到酯相提取物；

(3)将步骤(2)的酯相提取物进行柱层析正相洗脱，即可，其中所述的柱层析正相洗脱用洗脱剂按照下述洗脱步骤进行：①(70～95)％A+(5～30)％B→②100％A→③(97～99)％A+(1～3)％C→④(90～97)％A+(3～10)％C→⑤(80～90)％A+(10～20)％C；所述的A为乙酸乙酯，所述的B为正己烷，所述的C为甲醇；所述的百分比为体积百分比。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的乳杆菌为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的乳杆菌的发酵液通过下述步骤制得：将乳杆菌在液体培养基中发酵即得乳杆菌的发酵液；

和/或，步骤(1)中，所述的乳杆菌的发酵液在用乙醇沉淀之前，先进行浓缩；

和/或，步骤(1)中所述的乙醇的用量为使得溶液中乙醇的最终体积浓度为68％～72％为止；

和/或，步骤(1)中，所述的沉淀通过下述步骤进行：加入乙醇，搅拌均匀后于2-6℃静置24-72h使充分沉淀，然后以5000-12000rpm的转速于2-6℃下离心10-30min。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的乳杆菌的发酵液通过下述步骤制得：将-80℃冻存的乳杆菌接种于乳酸细菌培养基平板，在37℃厌氧培养24-72h；从该平板上挑取单菌落接种于液体培养基中于30-42℃厌氧培养8-16h获得一级种子液；接着再将该一级种子液以3-5％的接种量接种于液体培养基进行扩大培养即得。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的浓缩通过下述步骤进行：将所述的乳杆菌的发酵液于40-65℃、真空度小于0.1MPa条件下浓缩至原发酵液浓度的5-20倍。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩通过下述步骤进行：将所述的乳杆菌的发酵液在温度为60℃、相对压力为-0.08MPa的条件下浓缩至原发酵液浓度的10倍。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，在萃取之前先进行浓缩；

和/或，步骤(2)中，所述的萃取通过下述步骤进行：加入0.5-2倍体积水稀释均匀后，再加入与水等体积的乙酸乙酯振荡后静置0.5-2h，再将水相用等体积的乙酸乙酯再萃取1-4次。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的浓缩通过下述步骤进行：将所述的上清液经40-65℃条件下旋转蒸发浓缩至体积减少一半。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的柱层析正相洗脱用洗脱剂按照下述洗脱步骤进行：①80％A+20％B→②100％A→③98％A+2％C→④95％A+5％C→⑤85％A+15％C。