[发明专利]一种转化芽孢杆菌的方法

权利要求书

1.一种转化芽孢杆菌的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）、将待转化菌株划线接种到LB平板上，于37℃的条件下培养16-24h；将含有待转化质粒的大肠杆菌划线接种到含有对应抗生素的LB平板上，37℃下生长16-24h；

（2）、挑取步骤（1）中待转化菌株的单菌落接种到玻璃试管中，每支玻璃试管含有3ml MA培养基，于37℃，200rpm下培养15-18h，得待转化的菌株；将步骤（1）中的大肠杆菌接种到玻璃试管中，每管含有对应抗生素的LB培养基4-6ml，于37℃，200rpm下培养16-22h；

（3）取步骤（2）中待转化的菌株300ul，接种到2.7ml MA培养基中，然后置于玻璃试管中，37℃，200rpm培养3h；

（4）取步骤（3）中的待转化菌株，然后稀释2-20倍接种到MB培养基中，终体积为3ml，置于玻璃试管中，30℃-37℃，200rpm下培养90min；MB培养基由以下成分构成：1×MA base，1×MA salt，1%体积的50%的葡萄糖溶液，0.5mM氯化钙，2.5mM氯化镁；其中MA base和MA salt以10×母液配制，4℃保存；氯化钙、氯化镁以100×母液配制，4℃保存；

（5）取步骤（2）中含有质粒的大肠杆菌菌液，13400×g离心1min，去上清，用MB培养基洗涤两次，去除残余的抗生素；

（6）在步骤（5）中的大肠杆菌中加入0.2-1倍原始体积的步骤（4）中的待转化菌液，终体积1ml，加入终浓度为5-30mg/L多粘菌素B，正常筛选浓度的1/50-1/10的对应抗生素，置于玻璃试管中，37℃，200rpm培养30-90min；

（7）取步骤（6）中的菌液200-500ul，涂布于含有5-30 mg/L多粘菌素B以及含对应抗生素的平板上，培养20-40h，

挑取生长的单菌落进行鉴定，得到转化的芽孢杆菌；

步骤（2）中所述的MA培养基由以下成分构成：2×MA base，1×MA salt，1%体积的50%的葡萄糖溶液，其中MA base和MA salt以10×母液配制，4℃保存。

2.根据权利要求1所述的转化芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤（4）中为取步骤（3）中的待转化菌株，然后稀释10倍接种到MB培养基中，终体积为3ml，置于玻璃试管中，于30℃，200rpm的条件下培养90min。

3.根据权利要求1所述的转化芽孢杆菌的方法，其特征在于：所述的10×MA base由以下成分构成：10g/L酵母提取物，2g/L胰蛋白胨，10×MA salt由以下成分构成：150mM硫酸铵，800mM磷酸氢二钾，440mM磷酸二氢钾，35mM柠檬酸三钠，10mM硫酸镁。

4.根据权利要求1所述的转化芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤（6）中为0.5倍体积的待转化菌液，10mg/L的多粘菌素B，正常筛选浓度1/20的对应抗生素，培养1h。

5.根据权利要求1所述的转化芽孢杆菌的方法，其特征在于：步骤(7)中多粘菌素B为10 mg/L。