[发明专利]一种人外周血间充质干细胞的培养方法以及应用有效
| 申请号： | 201410690907.5 | 申请日： | 2014-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN104388385B | 公开（公告）日： | 2018-06-08 |
| 发明（设计）人： | 陈海佳;王一飞;葛啸虎;陈洁鸿;王小燕;罗二梅 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;A61K35/28;A61P17/16 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 外周血单个核细胞 培养基 血浆 间充质干细胞 人外周血 外周血 应用 生物技术领域 细胞 传统方式 皮肤衰老 悬浮细胞 有效培养 贴壁 重悬 采集 消化 融合 保证 | ||
【权利要求书】：
1.一种人外周血间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括：
步骤1、采集外周血，分离出血浆和外周血单个核细胞；
步骤2、将外周血单个核细胞用含步骤1所述血浆的M199培养基进行重悬，然后加入EGF因子培养3-5天；所述血浆的体积百分含量为10％，所述EGF因子的浓度为5-30ng/ml；
步骤3、去掉未贴壁的悬浮细胞，更换步骤2所述的添加了血浆和EGF因子的M199培养基继续培养，此后每2天更换一次新鲜培养基；
步骤4、当细胞达到80％-90％融合时，消化细胞，获得培养后的PB-MSC。
2.根据权利要求1所述培养方法，其特征在于，步骤1为：
采集外周血，离心，分离出上层血浆备用，然后将下层血细胞用等体积的生理盐水稀释后，缓慢加到装有淋巴细胞分离液的液面上，离心，离心后吸取外周血单个核细胞层，获得外周血单个核细胞。
3.根据权利要求1所述培养方法，其特征在于，所述培养的环境条件为37℃、5％CO2。
4.根据权利要求1所述培养方法，其特征在于，还包括将培养获得的PB-MSC按1:3进行传代的步骤。
5.根据权利要求1所述培养方法，其特征在于，步骤2所述外周血单个核细胞的细胞培养密度为1×106cells/ml。
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