[发明专利]婴幼儿配方乳粉中乳双歧杆菌的鉴定方法

权利要求书

1.一对乳双歧杆菌16S-23SrRNAITS的PCR扩增引物，其特征在于，所述的引物序列为：

Lactis16-23F:5'-CGTCCTTCATCGGTACTGTCTG-3'

Lactis16-23R:5'-CGGCTGGATCACCTCCTTTC-3'。

2.婴幼儿配方乳粉中双歧杆菌的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

提取待检样品的总DNA；

所述的待检样品为添加双歧杆菌的婴幼儿配方乳粉；

设置样品管、阳性对照管、阴性对照管，分别加入待测样品总DNA、乳双歧杆菌基因组总DNA、无DNA的蒸馏水为模板各2μL；各管加入引物Lactis16-23F（5μmol·L^-1）、Lactis16-23R（5μmol·L^-1）各1μL和其他PCR试剂；

对以上各管进行PCR扩增；

对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳；

结果判定：当阳性对照呈现529bp扩增条带，阴性对照没有扩增条带时，如果待测样品出现529bp条带时，待测样品为双歧杆菌，反之待测样品不是双歧杆菌。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，PCR反应的条件为：98℃变性10s，58℃退火5s，72℃延伸40s，32个循环。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述的其他PCR试剂为：

ddH₂O8.5μL，TakaraPrimeSTARMaxPremix(2×)12.5uL[Mg²⁺conc.(2×)=2mmol·L^-1,dNTPMixture(2×)=0.4mmol·L^-1each]，总体积25μL。