[发明专利]婴幼儿配方乳粉中乳双歧杆菌的鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及双歧杆菌菌种鉴定方法，尤其是动物双歧杆菌中乳双歧杆菌亚种 (Bifidobacteriumanimalissubsp.lactis)的鉴定方法。

背景技术

目前，为了改善婴幼儿肠道菌群的比例，维持肠道菌群平衡，帮助婴幼儿肠道和全 身健康，在婴幼儿配方乳粉中需要添加乳酸菌菌种，所述的乳酸菌如双歧杆菌等，合适 的双歧杆菌为动物双歧杆菌(主要为乳双歧杆菌亚种)、长双歧杆菌、短双歧杆菌、青 春双歧杆菌、两歧双歧杆菌等；

由于双歧杆菌属(Bifidobacterium)涉及众多的不同种和亚种的双歧杆菌，如表1所 示：

表1双歧杆菌各类菌株鉴定结果比较

为了能够确保所添加的乳酸菌为符合我国国家规定婴幼儿配方食品中允许使用的 动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种，因此，需要对添加在乳粉中的双歧杆菌进行鉴定。

目前，常规的方法是生化鉴定方法，如GB/T4789.34-2012食品微生物学检验双歧 杆菌的鉴定的方法，以及16SrRNA双歧杆菌属特异鉴定方法(KaufmannP1,Pfefferkorn A,TeuberM,MeileL.IdentificationandquantificationofBifidobacteriumspeciesisolated fromfoodwithgenus-specific16SrRNA-targetedprobesbycolonyhybridizationand PCR.ApplEnvironMicrobiol.1997Apr；63(4):1268-73)。但是，所述方法存在鉴定操作复 杂，结果不好判读，不能精确到菌种以及亚种水平的缺陷，不能满足相关领域的需要。

发明内容

本发明的目的是提供一种婴幼儿配方乳粉中双歧杆菌的鉴定方法，以克服现有技术 存在的缺陷，满足人们的需要。

本发明首先涉及一对乳双歧杆菌16S-23SrRNAITS的PCR扩增引物：所述的引物序 列为：

Lactis16-23F:5'-CGTCCTTCATCGGTACTGTCTG-3'

Lactis16-23R:5'-CGGCTGGATCACCTCCTTTC-3'

所述的乳双歧杆菌16S-23SrRNAITS的序列为：

CGTCCTTCATCGGTACTGTCTGCCAAGGCATCCACCATACGCCCATCACGACAACC ACAACACGGCCGCCATGACCAAAGCACTACTGAAAAACCCTAGAACGACATCAGA TCACGGGGACGCACCACACACGGCACGCCCCCATACGATTACGAACGAACCCAAG AAAAAACAATTCCTCGGATCCGAATCACAGTACGAACACCAACCCCACCCCAACG GGCGGGCCGATGCTCGCGTCCACTATCCAGTTCTCAAACCACCACCCCACCAGGA CACCCACCCCGCACCAACAGGCACCGGGCAACCGACCTGGGGGACACACTGGCA ACCACACCCCACACCAGGGGCCGGTGGCGGCCAGGGAACCCAACAGCACGCACC ACACCACACAATCCAATACGACTCTTCCACGCCAGCAAGCCAGGGCGGCGACGAC AAACCATCGCACTCGGCAAACCCCAGCCACAAAACCGTGCACAAAACCATGCAC GCCCATATTCTCCGTAGAAAGGAGGTGATCCAGCCG

该引物用于扩增双歧杆菌基因组DNA，可获得位于乳双歧杆菌16S-23SrRNAITS的 529bp的扩增片断。

所述的双歧杆菌基因组DNA，为用核酸提取方法获得的双歧杆菌基因组总DNA。

所述的乳双歧杆菌16S-23SrRNAITS区特异性的PCR扩增引物，是这样获得的：