[发明专利]一种快速高通量的疟原虫检测方法

权利要求书

1.一种快速高通量的疟原虫检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)血液样本进行DNA液提取；

(2)PCR扩增：

a.PCR反应体系包括：PCR反应缓冲液,待测样本基因特异性正、反向引物，PCR Grade H₂O,PCR Control,DNA提取液；

b.将PCR反应液加入已含有待测基因特异性探针的芯片反应室内，将芯片放入机器进行扩增反应；特异性探针是根据特异性引物扩增区内设计，能够区别其他物种；特异性探针点入芯片上；

(3)杂交：PCR扩增完后，将杂交反应液加入芯片，使杂交液和扩增液都进入到杂交舱内杂交反应；

(4)清洗：杂交后的芯片用洗液冲洗，直接用荧光扫描仪检测；

(5)结果判读；

所述的待测样本基因为恶性疟、间日疟、三日疟各自特有基因。

2.根据权利要求1所述的快速高通量的疟原虫检测方法，其特征在于：所述的特有基因分别是恶性疟的mdr、crt、18SrRNA基因，间日疟的SSUrRNA、csp、18SrRNA基因，三日疟的18SrRNA基因。

3.根据权利要求1所述的快速高通量的疟原虫检测方法，其特征在于：所述的特异性正反引物和探针是：

恶性疟原虫

mdr基因

Pf1-F:GTGTTGAAAGATGGGTAAAGAGCAGA  (SEQ ID NO 1)

Pf1-R:CGTACCAATTCCTGAACTCACTTGTTC  (SEQ ID NO 2)

Probe:GAACAAAAAGAGTACCGCTGAA  (SEQ ID NO 3)

crt基因

Pf2-F:GGTGGAGGTTCTTGTCTTGGTAAATG  (SEQ ID NO 4)

Pf2-R:CGGATGTTACAAAACTATAGTTACC  (SEQ ID NO 5)

Probe：GTATTATTTATTTAAGTGTATGTGT  (SEQ ID NO 6)

18SrRNA基因

Lm2-F：ATTGCTTTTGAGAGGTTTTGTTAC  (SEQ ID NO 7)

Lm2-R：GCTGTAGTATTCAAACACAATGAAC  (SEQ ID NO 8)

Probe：CATAACAGACGGGTAGTCAT  (SEQ ID NO 9)

间日疟原虫

SSUrRNA基因

Pv1-F:AGTTCGTGAATATGATTTGTC  (SEQ ID NO 10)

Pv1-R:CTGCGCTTCTGTACTTGGC  (SEQ ID NO 11)

Probe:GGGGATTGCAATTATACTTCGTGTCG  (SEQ ID NO 12)

csp基因

Vp2-F:GGTGAGAACCCAGATGACGAGG  (SEQ ID NO 13)

Vp2-R:TGGACTCCATGCAGTGTAACCTGT  (SEQ ID NO 14)

Probe：GGTGATGGAGCAGCTGTACAG  (SEQ ID NO 15)

18SrRNA基因

Lm2-F：GCAACGCTTCTAGCTTAATCCAC  (SEQ ID NO 16)

Lm2-R：CAAGCCGAAGCAAAGAAAGTCC  (SEQ ID NO 17)

Probe：ACTTTGTGCGCATTTTGCTA  (SEQ ID NO 18)

三日疟原虫

18SrRNA基因

Pm1-F:GTTAAGGGAGTGAAGACGATCAGATACCGT  (SEQ ID NO 19)

Pm1-R:GCCCCAGAACCCAAAGACTTTGATTTCTCA  (SEQ ID NO 20)

Probe:ATGAGTGTTTCTTTTAGATAGC  (SEQ ID NO 21)

和

Pm2-F:ATAACATAGTTGTACGTTAAGAATAACCGC  (SEQ ID NO 22)

Pm2-R:AAAATTCCCATGCATAAAAAATTATACAAA  (SEQ ID NO 23)

Probe：GTATAATTTTTTATGCATGGGAAT  (SEQ ID NO 24)