[发明专利]一种利用定点切割系统对猪H11位点定点插入的方法有效
| 申请号： | 201410699684.9 | 申请日： | 2014-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN104531686A | 公开（公告）日： | 2015-04-22 |
| 发明（设计）人： | 李奎;阮进学;杨述林;李和刚;牟玉莲;吴添文;魏景亮;徐奎;黄雷;周荣 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/63;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京市京大律师事务所 11321 | 代理人： | 王凝;张波 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 定点 切割 系统 h11 插入 方法 | ||
1.一种利用定点切割系统对猪H11位点定点插入的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)设计被敲除基因的5’端同源臂和3’端同源臂以及相应的通用引物；2)将上述同源臂、通用引物和欲插入的基因引入到载体中，得到在打靶载体；3)转染细胞；4)PCR扩增鉴定插入结果。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的5’端同源臂的核苷酸序列如序列表中的序列1所示。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的5’端同源臂的通用引物核苷酸序列如序列表中序列2所示。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的3’端同源臂的核苷酸序列如序列表中的序列3所示。
5.根据权利要求4所示的方法，其特征在于，所述的3’端同源臂的通用引物核苷酸序列如序列表中序列4所示。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中所用到的PCR扩增引物的核苷酸序列如序列表中序列5、序列6、序列7、序列8、序列9、序列10所示。
7.通过权利要求1所述的方法得到的一种打靶载体。
8.根据权利要求7所述的打靶载体，其特征在于，其序列包括上述的5’端同源臂通用引物序列、5’端同源臂序列、欲插入的基因序列、3’端同源臂通用引物序列、3’端同源臂序列。
9.根据权利要求8所述的打靶载体，其特征在于，还包括筛选元件Neo基因序列和/或DTA基因序列；或是不包括筛选元件的序列。
10.根据权利要求8或9所述的打靶载体，其特征在于，其核苷酸序列如序列表中的序列11所示。
11.权利要求8所示的打靶载体在构建猪定点突变库上的应用。
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