[发明专利]草木犀药材指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及本发明涉及中药材指纹图谱的构建方法，尤其是草木犀药材高 效液相色谱(HPLC)指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。本发明属于药 物分析技术领域。

背景技术

中药指纹图谱特指中药样本经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各 组分群体特征的图谱或图像。中药指纹图谱作为一种综合的、可量化的质量控 制手段，可提供比单一指标成分更全面的信息。目前，美国FDA、英国草药 典、印度草药典、德国药用植物学会、加拿大药用植物协会等均接受指纹图谱 的指控方法，中国药品监督管理局也颁发了《中药注射剂指纹图谱研究的技术 要求(暂行)》。中药材、中成药指纹图谱技术已经成为牵动行业全面进步、带 动中药现代化、推动中药走向世界的关键技术之一。

草木犀，又写作草木樨，为豆科植物草木犀属(MelilotusMill.)一年生或 二年生草本。以全草入药，生于沙丘、山坡、草原、海边，分布于我国大部分 省区，又名辟汉草、省头草、野苜蓿及铁扫把，目前栽培的多为白花草木犀和 黄花草木犀。黄花草木犀由于其自身的生长优势和化学成分适宜，在中国被用 作很好的香料原料。民间以叶、花制成软膏，用作外用药，或煎服用于治疗浮 肿、腹痛、疟疾等证。

本专利中提供了一种草木犀药材指纹图谱的构建方法，该方法简单、快速、 有效。

发明内容

本发明提供一种草木犀药材指纹图谱的构建方法，以及由此方法得到的草 木犀标准指纹图谱。所述方法前处理比较简单，并且获得的指纹图谱出峰数目 多，各峰分离度较好，在线分析时间短，构成了草木犀药材的指纹特征，可作 为草木犀药材的标准指纹图谱。

本发明的草木犀药材高效液相色谱指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

1)称取草木犀药材粉末，加入体积百分浓度为30～70％的甲醇水溶液， 超声震荡提取，将提取液过滤得到滤液，即得到待测溶液；

2)将步骤1)获得的待测溶液进行高效液相色谱分析，用十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以质量百分浓度为0.05～0.2％磷酸水溶 液为流动相B，进行线性梯度洗脱得到草木犀药材的指纹图谱，其中，流速为 0.8～1.2ml/min；

检测波长为275nm。

所述方法中，所述步骤2)中梯度洗脱程序以如下体积比浓度配置进行：

，即所述步骤2)中梯度洗脱程序如下:

梯度1：第0-5min进行等度洗脱，流动相A的体积百分浓度为3～10％， 流动相B的体积百分浓度为97～90％；

梯度2：第5-45min进行线性梯度洗脱，流动相A的体积百分浓度由3～10％ 线性增至22～25％，流动相B的体积百分浓度由97～90％线性降至78～75％；

梯度3：第45-60min进行线性梯度洗脱，流动相A的体积百分浓度由22～25％ 线性降至3～10％，流动相B的体积百分浓度由78～75％线性升至97～90％。

在本发明一个技术方案中，所述步骤2)中梯度洗脱程序以如下体积比浓 度配置进行：

，即所述步骤2)中梯度洗脱程序如下:

梯度1：第0-5min进行等度洗脱，流动相A的体积百分浓度为3％，流动 相B的体积百分浓度为97％；

梯度2：第5-45min进行线性梯度洗脱，流动相A的体积百分浓度由3％ 线性增至22％，流动相B的体积百分浓度由97％线性降至78％；

梯度3：第45-60min进行线性梯度洗脱，流动相A的体积百分浓度由22％ 线性降至3％，流动相B的体积百分浓度由78％线性升至97％。

所述方法中，所述步骤2)中十八烷基硅烷键合硅胶为YMCJ'sphere ODS-M80、YMC-PackODS-A或AgilentEclipsePlusC18；流动相B为质量百 分浓度为0.1％的磷酸水溶液；流速为1.0ml/min。

在本发明一个技术方案中，所述步骤2)中所述高效液相色谱分析的柱温 25～45℃，优选为30℃。