[发明专利]定量分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分析方法，具体涉及同时定量分析甘油作原料微生物生产 1,3-丙二醇发酵液中1,3-丙二醇、甘油、乙酸、乙醇、2,3-丁二醇、乳酸和琥珀 酸的方法，它是一种高效液相色谱法。

背景技术

1，3-丙二醇是无色无味的粘稠液体，可溶于水、醇、醚等多种有机溶剂。 近年来，作为重要的有机合成原料和中间体具有广泛的应用。主要用于增塑剂、 洗涤剂、防腐剂、乳化剂的合成，也可用于食品、化妆品和制药等行业。特别 是在聚酯合成方面具有独特的性能，不但可以使聚酯塑料具有易于自然循环的 可生物降解特性，而且是制造性能优异的新型聚酯纤维(PTT)的重要单体原 料。

甘油为原料发酵生产1,3-丙二醇过程中，产生乙酸、乙醇、2,3-丁二醇、 乳酸、琥珀酸、柠檬酸等副产物。目前，有文献报道用高效液相色谱法测定 1,3-丙二醇发酵液中的有机酸，有用化学分析法测定发酵液中甘油含量，有用 FTIR法直接测定丙二醇的含量，有用色质联用衍生法测定1,3-丙二醇等多羟 基醇类，有用高效液相色谱方法测定2,3-丁二醇的含量等，但上述方法均不能 满足我们的需要。在1,3-丙二醇项目前期，我们用气相色普法分析发酵液中的 1，3-丙二醇含量，但其重现性较差等，不能满足工艺的需要。后来，我们逐 步建立了HPLC分析方法。该分析方法操作简便简单，准确度高，可以同时分 析1,3-丙二醇发酵液中1,3-丙二醇、甘油、乙酸、乙醇、2,3-丁二醇、乳酸和 琥珀酸的含量，对生物发酵工艺起到了很大的指导作用。

发明内容

本发明的目的在于能够提供一种快速、简便、实用的分析方法，能够同时 定量分析1,3-丙二醇发酵液中1,3-丙二醇、甘油、乙酸、乙醇、2,3-丁二醇、 乳酸和琥珀酸的含量，对发酵工艺起指导作用，提高1,3-丙二醇的发酵收率。

本发明提供一种定量分析方法，用于同时定量分析1,3-丙二醇发酵液中 1,3-丙二醇、甘油、乙酸、乙醇、2,3-丁二醇、乳酸和琥珀酸，包括下述步骤：

(a)样品的处理

取经离心除去克雷伯菌体和高蛋白的1,3-丙二醇发酵液，用载液进行稀 释，过滤，得到待测样品；

(b)液相色谱分离条件的确定

色谱柱为配位体交换柱子，采用示差折光率检测仪，配位体交换柱子在进 样前进行活化；

(c)进样检测

将步骤(a)得到的待测样品进样至经步骤(b)活化后的配位体交换柱子 进行检测；

(d)计算

以外标法计算所述1,3-丙二醇、甘油、乙酸、乙醇、2,3-丁二醇、乳酸和 琥珀酸的含量。

其中，所述步骤(a)中过滤时使用的滤膜孔径优选在0.22μm以下。

所述步骤(b)中示差折光率检测仪的检测器温度优选为60℃。

所述步骤(b)中活化条件为：流动相流速优选为0.6mL/min、柱温优选 为65℃条件下，活化时间优选150个小时以上。

所述步骤(c)中检测条件为：流动相优选为0.005mol/L的硫酸水溶液， 流速优选为0.6mL/min，柱温优选为65℃，进样量优选为20μL。

本发明适用于以甘油为原料发酵生产1,3-丙二醇的控制分析方法。

本发明有益效果：

本发明分析方法操作简便简单，易实现，准确度高,可以同时分析1,3-丙二 醇发酵液中1,3-丙二醇、甘油、乙酸、乙醇、2,3-丁二醇、乳酸和琥珀酸的含 量，对生物发酵工艺起到了很大的指导作用。

附图说明

图1：实例1条件下标准溶液的色谱图(1—柠檬酸；2—琥珀酸；3—乳 酸；4—甘油5—乙酸；6—1,3-丙二醇；7、8—2,3-丁二醇；9—乙醇)；

图2：实例2条件下发酵液的色谱图(1—柠檬酸；2—琥珀酸；3—乳酸； 4—甘油5—乙酸；6—1,3-丙二醇；7、8—2,3-丁二醇；9—乙醇)；

图3：实例2条件下标准溶液的色谱图(1—柠檬酸；2—琥珀酸；3—乳 酸；4—甘油5—乙酸；6—1,3-丙二醇；7、8—2,3-丁二醇；9—乙醇)；

图4：实例2条件下发酵液的色谱图(1—柠檬酸；2—琥珀酸；3—乳酸； 4—甘油5—乙酸；6—1,3-丙二醇；7、8—2,3-丁二醇；9—乙醇)。

具体实施方式