[发明专利]黄绿蜜环菌抗肝癌活性组分的提取方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种黄绿蜜环菌抗肝癌活性组分的提取方 法，以及该提取得到的活性组分在制备抗肝癌药物中的应用。

背景技术

黄绿蜜环菌，俗称黄蘑菇，其风味独特，是一种优良的野生食用与药用真菌，也是 一种重要的高原生物资源，在青海祁连被称为祁连“八宝”之一。野生黄绿蜜环菌子实 体子肥厚，味道鲜美、滑脆爽口，具有特殊的香味，且营养丰富，含丰富的蛋白质、氨 基酸、维生素、矿物质、生物碱、挥发油和多糖等营养成分，还含有少量有机酸、黄酮、 强心苷、挥发油、甾体三萜类、苷类、香豆素萜类、鞣质、酚类等化合物。特别是硒的 含量很高，具有很强的抗肝癌功能。研究表明黄绿蜜环菌还具有防治神经炎、脚气病、 促进儿童发育、抗衰老、抗流感以及抗肿瘤等生物活性。

公开号为101709322B的中国发明专利“生物催化白桦脂醇合成白桦脂酸的方法” 公开了一种通过黄绿蜜环菌生物转化合成白桦脂酸；公开号为101113413B的中国发明 专利“一种黄绿蜜环菌纤溶酶及其生产方法”公开了一种利用黄绿蜜环菌代谢合成纤溶 酶的方法；公开号为100999750B的中国发明专利“一种微生物细胞生物转化对羟基苯 甲醇合成天麻素的方法”公开了一种利用黄绿蜜环菌生物转化合成天麻素的方法。上述 中国专利文件中关于黄绿蜜环菌子实体的研究，主要集中在生物转化上，并未涉及黄绿 蜜环菌子实体的化学成分，对其化学成分的研究甚少。

李世峰等发表的“两种野生食用菌抗氧化及抗肿瘤活性研究”(中国食用菌 [J].2004,24(3):58-63)中公开了一种黄绿蜜环菌抗肿瘤活性组分的提取方法：将子实体 粉碎，用80％乙醇加热回流3h，重复提取3次，提取液合并浓缩后，依次用石油醚和 乙酸乙酯萃取，剩余部分用三倍体积无水乙醇沉淀，共得到石油醚相、乙酸乙酯相、剩 余醇溶相和水溶性粗多糖四相提取物，分别烘干备用。该方法存在以下缺陷：(1)采 用传统的溶剂萃取法(液液萃取)进行有效活性组分的提取，批次之间不具有重复性， 即无法保证第一批萃取得到的物质组分与第二批萃取得到的物质组分之间的一致性；(2) 采用这种液液萃取的方法，物质在不同溶剂中的分配过程需要的时间非常长，而且要多 次萃取(一般三次，每次换新的溶剂)、然后合并，这导致整个提取过程的时间周期长， 试剂耗费量大。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对以上现有技术的不足，提供一种黄绿蜜环菌抗肝 癌活性组分的提取方法，该方法对样品初步处理后，主要采用高效液相色谱进行分离纯 化，分离方法稳定，重复性高，制备量大，操作简单省时，适合工业化大生产。

本发明所采用的技术方案为：

一种黄绿蜜环菌抗肝癌活性组分的提取方法，该方法包括以下步骤：

(1)以黄绿蜜环菌子实体为原料，室温阴干处理后，在40～60℃温度下烘干脱水， 然后进行超微粉碎处理，获得超微粉；

(2)将步骤(1)所得的超微粉按1g︰(5～15)mL的料液比加入乙醇，在30～70 ℃温度下提取1～6h，每0.5h～1h搅拌一次，室温静止1～5h后离心，取沉淀重复1～3次， 合并所得上清液减压浓缩至膏状，获得黄绿蜜环菌小分子乙醇提取物；

(3)按质量体积比(g/mL)加入5～10倍的正己烷-乙醇二元混合溶剂，进行超声 溶解，溶解后过有机滤膜，得到黄绿蜜环菌小分子乙醇提取物的样品溶液；

(4)将步骤(3)获得的小分子乙醇提取物的样品溶液在以填料为正相分离材料 Silica的制备色谱上进行分离纯化，采用A为正己烷、B为乙醇的二元流动相体系，分 离纯化的条件为：0～18min93％A-7％B(即按体积百分比93％A、7％B配比而成，下同 理)等度洗脱、18～28min60％A-40％B等度洗脱、28～45min5％A-95％B等度洗脱，根 据紫外吸收光谱收集20-26min洗脱液(Fr5峰)、27.25-28.5min洗脱液(Fr7峰)、 38.5-41min洗脱液(Fr13峰)，减压浓缩并烘干，得到本发明抗肝癌活性组分。

作为优选，所述步骤(1)中超微粉碎在-20～4℃温度下进行，时间为5～20min。

作为优选，所述步骤(2)中乙醇的提取温度为30～70℃，优选为65℃。

作为优选，所述步骤(3)中正己烷-乙醇二元混合溶剂的正己烷与乙醇的体积比为 2︰1。