[发明专利]从黄绿蜜环菌中提取麦角甾醇的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种从黄绿蜜环菌中提取麦角甾醇的方法，以及该得到的麦角甾醇在制备抗肝癌药物中的应用。

背景技术

麦角甾醇(ergosterol)，又称麦角固醇，是一种重要的植物甾醇，主要存在于酵母和麦角中。麦角甾醇是生产维生素D2的前体，有维生素D2的作用，也是微生物细胞膜的重要组成部份，对确保细胞膜的完整性、膜结合酶的活性、膜的流动性、细胞活力以及细胞物质运输等起着重要作用。

研究表明，麦角甾醇不仅可用于黄酮类等药物的生产，而且麦角甾醇是具有生理活性应用安全天然药物，也是动植物的生长激素，具有消炎、退热、抗溃疡作用，对于治疗宫颈癌、皮肤癌等肿瘤疾病都有明显疗效。麦角甾醇还能防止足底、膝及手掌等皮肤干燥及，能防止和抑制鸡眼形成，改善皮肤触感，是生产香水、洗发液、润肤膏等化妆品、护肤品的主要活性成分之一。

授权公开号为CN102659890B的中国发明专利公开了一种大本中麦角甾醇的提取方法，它采取提取、浓缩、裂解、亲酯提取、皂化、催萃取与提纯等一系列步骤后成功提取到麦角甾醇，但是该方法不仅步骤繁琐、耗时，而且其得到的麦角甾醇纯度只能达到80％，这对于麦角甾醇作为药物组分的纯度要求还存在差距。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对以上现有技术问题，提供一种从黄绿蜜环菌中提取麦角甾醇的方法，该方法采用二维高效液相色谱进行分离纯化，分离方法稳定，重复性高，制备量大，操作简单省时，得到的麦角甾醇纯度可以达到95％以上。

本发明所采用的技术方案为：

一种从黄绿蜜环菌中提取麦角甾醇的方法，该方法包括以下步骤：

(1)以黄绿蜜环菌子实体为原料，室温阴干处理后，在40～60℃温度下烘干脱水，然后进行超微粉碎处理，获得超微粉；

(2)将超微粉按1g︰(6～15)mL的料液比加入分析纯水，混合均匀后在60～90℃温度下提取1～2h，提取结束后在4000～8000rpm转速下离心，取沉淀重复1～3次，最后得到沉淀放入烘箱50～80℃干燥处理；

(3)在步骤(2)所得的干燥沉淀中按质量体积比(g/mL)加入1～5倍的丙酮冷浸提取3～8h，提取结束后在4000～8000rpm转速下离心，取沉淀重复1～3次，收集所有上清液减压浓缩至膏状，获得小分子提取物；

(4)在小分子提取物中按质量体积百分比(g/mL)加入5～10倍的正己烷-乙酸乙酯二元混合溶剂，进行超声溶解，溶解后过有机滤膜，得到含有小分子提取物的一维上样溶液；

(5)对一维上样溶液进行高效液相色谱分离：采用的色谱柱为Silica正相硅胶色谱柱，采用的流动相为二元混合有机相，其中A相为正己烷，B相为乙酸乙酯，进样量为800-1200mL/针，流动相流速为600-750mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长260nm，采用的洗脱方式为A相浓度100％等度洗脱0～15min、A相浓度60％(即按体积百分比A相60％、B相40％配比而成，下同理)等度洗脱15～35min、B相浓度100％等度洗脱35～60min，根据紫外吸收光谱收集25-29min洗脱液(Fr6峰)作为目的组分，减压浓缩至膏状，得到一维液相组分；

(6)在得到的一维液相组分中按质量体积百分比(g/mL)加入5～10倍的正己烷-乙酸乙酯二元混合溶剂，进行超声溶解，溶解后过有机滤膜，得到二维上样溶液；

(7)进行二维高效液相色谱分离：采用的色谱柱为Silica正相硅胶色谱柱，采用的流动相为二元混合有机相，其中A相为正己烷，B相为乙酸乙酯，进样量为20-80mL/针，流动相流速为40-80mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长260nm；采用的洗脱方式为A相浓度88％等度洗脱0-45min，根据紫外吸收光谱收集27.5-36min洗脱液(Fr6-4峰)作为目的组分，旋转蒸发浓缩至干，即为本发明目的化合物麦角甾醇。

作为优选，所述步骤(4)、(6)中正己烷-乙酸乙酯二元混合溶剂中正己烷的体积分数为50～90％。

作为优选，所述步骤(5)中的Silica正相硅胶色谱柱的尺寸为直径50mm、柱长250mm，其中硅球粒径为8μm，使用时柱温为室温或25-40℃。

作为优选，所述步骤(7)中的Silica正相硅胶色谱柱的尺寸为直径50mm、柱长250mm，其中硅球粒径为10μm，使用时柱温为室温或25-40℃。