[发明专利]从万寿菊中分离纯化槲皮万寿菊素的方法

说明书

本发明提供一种从万寿菊中分离纯化槲皮万寿菊素的方法，它包括以下步骤：将万寿菊干花干燥后磨成粉末，用乙醇浸泡或回流提取，过滤的滤液旋转蒸发至干后溶于甲醇‑水混合溶剂中；进行一维液相色谱：以DAISO C₁₈为色谱柱，A相水、B相甲醇为流动相，B相浓度50‑55％等度洗脱20min，根据紫外吸收光谱收集6‑12分钟洗脱液作为目的组分，旋转蒸发至干后再溶于甲醇‑水混合溶剂；进行二维液相色谱：以Acchrom X‑Amide为色谱柱，A相水、B相乙腈为流动相，B相浓度92‑98％等度洗脱40min，根据紫外吸收光谱收集27‑33分钟洗脱液作为目的组分，旋转蒸发至干得到纯度达99％以上的槲皮万寿菊素。

技术领域

本发明涉及植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种从万寿菊中分离纯化槲皮万寿菊素的方法。

背景技术

万寿菊，又名金菊花，学名Tagetes erecta，菊科万寿菊属，为一年生草本植物，除具有观赏价值外，还具有很好的药用价值。万寿菊花中所含的槲皮万寿菊素(Quercetagetin)是万寿菊所特有的黄酮类化合物，具有抗炎、抗过敏、降血压、抗心律失常、抗血小板凝集、抗氧化等作用，其分子式为C₁₅H₁₀O₈，分子量318.237，结构式如下：

论文“万寿菊素和槲皮万寿菊素的分离和结构鉴定”(广州医学院学报1990年第18卷第1期)提出利用有机溶剂提取及重结晶的方法可以得到槲皮万寿菊素结晶，但是该结晶是通过多次萃取和多次重结晶得到的，不仅操作复杂，工作量大，成本高，更为重要的是，该方法不具备重复性，不适合工业化大生产。

公开号为CN102190646B的中国发明专利也公开了一种槲皮万寿菊素的制备方法，它提出采用制备型高速逆流色谱仪进行提取，得到的槲皮万寿菊素纯度可以达到95％以上，但是该方法分离组分有限、分离效率低，不适用成分复杂的物质如万寿菊全花的分离纯化。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对以上现有技术问题，提供一种从万寿菊中分离纯化槲皮万寿菊素的方法，该方法直接以万寿菊花为原料，采用二维高效液相色谱进行分离纯化，经过工艺摸索和参数优化，得到的槲皮万寿菊素纯度可以达到99％以上。

本发明所采用的技术方案为：

一种从万寿菊中分离纯化槲皮万寿菊素的方法，该方法包括以下步骤：

(1)以万寿菊干花为原料，干燥后磨成粉末状得到万寿菊粗粉，用乙醇浸泡或者回流提取，然后过滤，取滤液重复1-3次，最终所得滤液进行旋转蒸发至干得粗提物，粗提物再溶于甲醇-水二元混合溶剂中，进行减压抽滤，得到粗提物浓度为50-500mg/mL的提取液；

(2)对提取液进行一维液相色谱分离：采用的色谱柱为反相色谱柱DAISO C₁₈，采用的流动相为A相水、B相甲醇的二元流动相，进样量为100-1000μL/针，连续进样，流动相流速为6-16mL/min，洗脱方式为B相浓度50-55％(即按体积百分比B相50-55％、A相45-50％混合而成的液体，下同理)等度洗脱20min，检测器为紫外检测器、检测波长200-260nm，根据紫外吸收光谱收集6-12分钟洗脱液作为目的组分，旋转蒸发浓缩至干，得到一维液相组分；

(3)使用甲醇-水二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解至浓度为50-100mg/mL；

(4)进行二维液相色谱分离：采用的色谱柱为Acchrom X-Amide色谱柱，采用的流动相为A相水、B相乙腈的二元流动相，进样量为10-500μL/针，连续进样，流动相流速为2-4mL/min，洗脱方式为B相浓度92-98％等度洗脱40min，检测器为紫外检测器、检测波长200-260nm，根据紫外吸收光谱收集27-33分钟洗脱液作为目的组分，旋转蒸发浓缩至干，得到目的产物槲皮万寿菊素。