[发明专利]一种采用动态轴向压缩柱系统制备纽莫康定B0的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备卡帕芬净前体—纽莫康定B₀的纯化方法，属于药物化学领域。

背景技术

纽莫康定B₀是由霉菌Glarea lozoyensis发酵所得的次级代谢产物。发酵液中除含有B0外，还有C₀等组分，纽莫康定B₀主要用于合成药物卡帕芬净。

中国发明专利200910133118.0和201110266790.4都公开了采用树脂柱工艺纯化制备纽莫康定B₀的方法，但均没有对相关物质（如：C₀）的检测和纯度控制进行描述，一般发酵液中的C₀杂质含量在10%左右，若不有效控制，得到的B₀和C₀混合物将在下一步合成反应中严重影响卡帕芬净的质量。

中国发明专利201410051009.5所公开的方法虽对C₀杂质进行了检测和纯度控制，但它的回收率不高，只有30~40%左右，而且采用TLC监测，操作复杂，对流出物需分小份（如接收的每一小杯100ml）进行HPLC检测，不利于实际生产应用。且其采用传统的层析柱，洗脱时间长、柱效低、使用寿命短，这些都会影响生产成本。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种采用动态轴向压缩柱系统纯化纽莫康定B₀并在线监测的新方法，该方法关键在于两点：1.采用动态轴向压缩柱，装柱简单、柱使用寿命长、柱床稳定、柱效高；2.通过紫外检测器在线监控收集洗脱组分，操作简单，可应用于工业规模化生产，生产成本低。包括以下步骤：

a. 发酵液预处理：将含有纽莫康定的发酵液调pH至2~4酸沉，过滤后浸提、离心，加入活性炭脱色得无色滤液；

b. 装柱：将10μm~75μm硅胶用异丙醇匀浆，装入动态轴向压缩柱，装柱压力为6~10Mpa；

c.上样并收集：将步骤a所得无色滤液浓缩干燥后，加入氯仿/甲醇混合物溶解，过柱，并用氯仿/甲醇/水混合液洗脱，洗脱液的体积比为78/18/1~82/17/3，上样量为所装硅胶重量的0.1~0.3倍。洗脱过程中采用紫外检测器在线监测，检测波长为280nm~350nm，根据所出色谱图，在目的物质的对应峰处收集，将收集所得馏分浓缩干燥即得高纯度纽莫康定B₀。

本发明的有益效果：1、本工艺采用动态轴向压缩柱，而不是传统的树脂柱或中低压柱，柱床稳定，柱效高，便于杂质的去除，使用寿命长；2、通过紫外检测器在线监控收集洗脱组分，而非传统的TLC监测，操作简单，易控制，工艺技术简化，适合大规模生产制备；3、本工艺通过动态轴向压缩柱即可直接得到高纯度的纽莫康定B₀，无需后续重结晶操作，简化了工艺步骤，缩短时间，降低成本。

综上所述，本发明能够有效去除反应体系中的杂质，特别是相关物质去除明显，所得目标物质纯度高，整个工艺过程简单，易操作，成本大幅降低，适合工业化生产。

附图说明

图1是纽莫康定粗品的液相色谱法测定图谱。

图2是纽莫康定B₀液相色谱法测定图谱。

具体实施方式

实施例1

1.将含有纽莫康定的发酵液的pH调至2做酸沉处理，过滤后浸提、离心，加入活性炭脱色得无色滤液；

2.将20μm硅胶用异丙醇匀浆，装入动态轴向压缩柱，装柱压力为6Mpa，柱填充尺寸为Φ50×250mm；

3.将步骤1所得的无色滤液浓缩干燥后，加入氯仿/甲醇混合物（体积比为1:5）溶解后得样液，将其泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，并用氯仿/甲醇/水混合液洗脱，洗脱液的体积比为78/18/1，上样量为所装硅胶重量的0.2倍。洗脱过程中采用紫外检测器在线监测，波长为280nm，根据所出色谱图，收集洗脱时间43min~55min之间的馏分。将收集所得馏分浓缩干燥既得纽莫康定B₀，经HPLC分析纯度为99.5%。

实施例2

1.将含有纽莫康定的发酵液的pH调至3做酸沉处理，过滤后浸提、离心，加入活性炭脱色得无色滤液；

2.将50μm硅胶用异丙醇匀浆，装入动态轴向压缩柱，装柱压力为8Mpa，柱填充尺寸为Φ150×250mm；