[发明专利]人CYP3A5基因检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种人CYP3A5基因检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提供包括待测样品、核酸扩增体系和荧光检测体系的混合物；

(2)通过扩增反应循环扩增待测样品中的靶多核苷酸；

(3)使所述荧光检测体系中的荧光发生基团与被扩增的靶多核苷酸序列间接结合；

(4)测定荧光发生基团所产生的荧光量，从而确定靶多核苷酸的存在及其相对量；

所述核酸扩增体系由如下组分组成：耐热DNA聚合酶、2’-脱氧核苷三磷酸、CYP3A5基因CYP3A5*1多态性的特异性正向引物和反向引物、CYP3A5基因CYP3A5*3多态性的特异性正向引物和反向引物；所述荧光检测体系是能够与靶多核苷酸结合并且两端分别结合有荧光发生基团和荧光淬灭基团的两条寡核苷酸探针。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述CYP3A5基因CYP3A5*1多态性的特异性正向引物为5′-CAC TTG ATG ATT TAC CTG CCT TC-3′；

所述CYP3A5基因CYP3A5*1多态性的特异性反向引物为5′-GGT CCA AAC AGG GAA GAG ATA T-3′；

所述CYP3A5基因CYP3A5*3多态性的特异性正向引物为5′-CAC TTG ATG ATT TAC CTG CCT TC-3′；

所述CYP3A5基因CYP3A5*3多态性的特异性反向引物为5′-GGT CCA AAC AGG GAA GAG ATA C-3′；

所述两条寡核苷酸探针分别为：

5’-CCCAACCTATGTCGGGTCCTTCTTC-3’，

5’-TGATGCAATCATTCGTCTGTTTCCC-3’。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扩增反应循环是重复35-45次的聚合酶链反应循环。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，先确定样品中的靶多核苷酸经扩增后所产生的荧光达到基线以上的固定阈值时所需的阈循环数；然后将上述测定的阈循环数与标准溶液中的靶多核苷酸的阈循环数相比较，以确定样品中靶多核苷酸的相对量，从而判断样品包含靶多核苷酸基因的纯合型与杂合型。

5.一种用于人CYP3A5基因检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：(1)分别装有反应液、EZ Taq酶混合液、标准液1、标准液2的多个密封离心管，(2)分隔并集中包装这些离心管的试剂盒；其中：

反应液由如下组分组成：由PCR反应缓冲液、2’-脱氧核苷三磷酸、CYP3A5基因CYP3A5*1多态性的特异性正向引物和反向引物、CYP3A5基因CYP3A5*3多态性的特异性正向引物和反向引物，寡核苷酸探针；

EZ Taq混合液：主要成份为热启动Taq酶；

标准液1：野生型YP3A5*1基因组DNA；

标准液2：突变型YP3A5*3基因组DNA；

所述CYP3A5基因CYP3A5*1多态性的特异性正向引物为5′-CAC TTG ATG ATT TAC CTG CCT TC-3′；

所述CYP3A5基因CYP3A5*1多态性的特异性反向引物为5′-GGT CCA AAC AGG GAA GAG ATA T-3′；

所述CYP3A5基因CYP3A5*3多态性的特异性正向引物为5′-CAC TTG ATG ATT TAC CTG CCT TC-3′；

所述CYP3A5基因CYP3A5*3多态性的特异性反向引物为5′-GGT CCA AAC AGG GAA GAG ATA C-3′；

所述寡核苷酸探针分别为：

5’-CCCAACCTATGTCGGGTCCTTCTTC-3’，

5’-TGATGCAATCATTCGTCTGTTTCCC-3’。