[发明专利]一种含BAD基因的转基因红豆杉细胞及富集紫杉醇的方法在审
| 申请号： | 201410717298.8 | 申请日： | 2015-08-04 |
| 公开（公告）号： | CN104498436A | 公开（公告）日： | 2015-07-29 |
| 发明（设计）人： | 徐茂军;张明;于沁;鲁力;叶昱;蒋智芳 | 申请（专利权）人： | 杭州师范大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/84;C12P17/02 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;李世玉 |
| 地址： | 310036 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 bad 基因 转基因 红豆杉 细胞 富集 紫杉醇 方法 | ||
1.一种含BAD基因的转基因红豆杉细胞，其特征在于所述转基因红豆杉细胞是将BAD基因重组至红豆杉细胞而获得。
2.如权利要求1所述含BAD基因的转基因红豆杉细胞，其特征在于所述BAD基因为小鼠BAD基因。
3.如权利要求1所述含BAD基因的转基因红豆杉细胞，其特征在于所述BAD基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。
4.如权利要求1所述含BAD基因的转基因红豆杉细胞，其特征在于所述转基因红豆杉细胞的制备方法为：将含EST启动子的pER 8.0质粒和BAD基因分别用限制性内切酶XhoI/SpeI酶切，将酶切后的产物连接，获得连接产物pEST-BAD，然后将连接产物pEST-BAD转化至农杆菌EHA105感受态细胞中，将转化后的农杆菌细胞涂布于含终浓度50mg/L壮观霉素及含终浓度50mg/L潮霉素的LB固体培养基上，37℃培养16～24h，筛选阳性菌落，即获得含BAD基因的转基因红豆杉细胞。
5.一种权利要求1所述含BAD基因的转基因红豆杉细胞中紫杉醇含量富集的方法，其特征在于所述的方法为：将含BAD基因的转基因红豆杉细胞接种至pH5.8±0.2、0.9～1.1mg/L 6-BA+1.4～1.6mg/L 2,4-D+0.09～0.15mg/L GA3+MS液体培养基中，28±2℃、转速为130～150rpm，黑暗培养25天，加入终浓度0.02mM的β-雌二醇，在28℃诱导培养10天，获得富含紫杉醇的转基因红豆杉细胞。
6.如权利要求5所述所述含BAD基因的转基因红豆杉细胞中紫杉醇含量富集的方法，其特征在于所述含BAD基因的转基因红豆杉细胞接种量为50～75mg/L。
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