[发明专利]一种利用外周血分离培养免疫细胞的方法在审
| 申请号： | 201410718862.8 | 申请日： | 2014-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN104480069A | 公开（公告）日： | 2015-04-01 |
| 发明（设计）人： | 陈海佳;王一飞;葛啸虎;应杰;罗二梅;王小燕 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 广州圣理华知识产权代理有限公司 44302 | 代理人： | 顿海舟;陈业胜 |
| 地址： | 510006 广东省广州市国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 外周血 分离 培养 免疫 细胞 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用外周血分离培养免疫细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将外周血在2000rpm、4℃条件下离心10min，收集上层血浆，配制成含血浆的无血清培养基，其中血浆的质量百分数为5％；
(2)将下层血细胞和生理盐水按照体积比1:2～2:1混合后，加入Ficoll分离液，混合液与Ficoll分离液的体积比为1:2～2:1，离心力为700g，离心20～40min；
(3)吸取白膜层，洗涤，即得到PBMC；
(4)在PBMC中加入无血清培养基，使细胞密度为5×105～20×105/ml，重悬细胞沉淀，接种于无血清培养基，并添加20～300U/mL IL-2和5～50ng/mL IL-15；
(5)当细胞密度大于2×106/ml时，添加无血清培养基，使细胞密度保持为5-105/ml～1×106/ml，补加20～300U/mL IL-2和5～50ng/mL IL-15；培养第13～15天，收集免疫细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述洗涤是用生理盐水洗涤两次。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述白膜层在离心后的上清液的从上往下数的第二层。
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