[发明专利]一种人外周血单个核细胞的分离方法在审
| 申请号： | 201410718871.7 | 申请日： | 2014-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN104480070A | 公开（公告）日： | 2015-04-01 |
| 发明（设计）人： | 陈海佳;王一飞;葛啸虎;陈洁鸿;王小燕;罗二梅 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 广州圣理华知识产权代理有限公司 44302 | 代理人： | 顿海舟;陈业胜 |
| 地址： | 510006 广东省广州市国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 人外周血 单个 细胞 分离 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种人外周血单个核细胞的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将外周血离心后，上层为血浆，下层为血细胞沉淀；
(2)在下层血细胞沉淀中加入等体积的羟乙基淀粉溶液，羟乙基淀粉溶液的浓度为4％-10％g/mL，混合均匀后在空气中自然沉降15～35min；
(3)将上清液缓慢转移至Ficoll淋巴细胞分离液表面，离心力为600g～800g,离心20～30min；
(4)离心后从下到上分为4层，依次为红细胞和粒细胞层、淋巴细胞分离液层、白膜层和血浆层；吸取白膜层，重悬，离心；
(5)离心后弃上清液，用1640培养基重悬细胞，调整细胞密度为5×105～10×105cells/mL,得到人外周血单个核细胞。
2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述羟乙基淀粉溶液的浓度为6％g/mL。
3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，步骤(4)所述重悬是加入生理盐水。
4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，步骤(4)和(5)所述离心的转速为1000～2000rpm/min，离心5～10min。
5.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，步骤(1)所述离心的转速为1500～3000rpm，离心时间为8～12min。
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