[发明专利]一种快速检测Ebola病毒的试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种试剂盒及其使用方法，具体地说，是一种快速检测Ebola病毒的试剂盒及其使用方法，属于基因检测技术领域。 

背景技术

埃博拉病毒(EBOV)是引起人类和灵长类动物发生埃博拉出血热(EBHF)的烈性病毒，研究人员在对塞拉利昂最早的埃博拉病例基因研究后宣称，该病毒在人际传播过程中出现了超过300个基因变化，这可能令当前开发中的诊断测试和试验性治疗的效果受到影响。Nucleoprotein(NP)是埃博拉病毒的一个核蛋白基因。 

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种使用方法简单，可快速检测埃博拉病毒的试剂盒。 

为解决上述技术问题，本发明提供的第一个技术方案是这样的：该快速检测Ebola病毒的试剂盒，由下述步骤依次制备： 

1)在Nucleoprotein基因的保守区域设计逆转录引物、扩增引物和探针： 

NP_F:AGAGGAGACAACTGAAGCTAATGC； 

NP_R:CTGATTGCCAAGCTGTTGGA； 

NP-Probe：FAM-CAAGTCTATTCCTTCCGAAATTGGTAGTAG； 

2)在GAPDH基因的保守区域设计逆转录引物和探针： 

GAPDH_F：AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC； 

用于逆转录引物为GAPDH_R_R:CAAGGGGTCTACATGGCAACT； 

用于扩增GAPDH_ARMS_R的引物为：GGTGGAATCATATTGGAACATGT； 

GAPDH_Prob_HEX：HEX-CTTTTAACTCTGGTAAAGTGGATATTGTTGCC； 

3)制备RT-TaqMan试剂盒 

用逆转录酶加上罗氏的热启动酶，其反应条件如下：50℃ 20分钟；40个循环：95℃ 5秒，56℃ 10秒，72℃ 30秒。 

上述的快速检测Ebola病毒的试剂盒，所述的逆转录酶与罗氏的热启动酶的用量比为1:1。 

本发明还提供了该快速检测Ebola病毒试剂盒的使用方法，该依次包括下述步骤： 

取Ebola virus病毒感染的细胞，提取RNA，用上述试剂盒检测Ebola virus病毒RNA。 

与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有如下技术优点： 

本发明以Nucleoprotein为靶基因，设计一步逆转录加Real time PCR扩增这个基因的保守区段，针对这个扩增片段的探针用FAM标记。同时引入内参GAPDH，用ARMS的方法设计扩增GAPDH的DNA片段，针对这个扩增片段的探针用HEX标记。该试剂盒使用方法简单，可快速检测埃博拉病毒。、 

附图说明

图1是本发明提供的试剂盒检测Ebola virus病毒的结果示意图。 

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。 

实施例1 

本发明提供的一种快速检测Ebola病毒的试剂盒，该试剂盒以Nucleoprotein为靶基因，设计一步逆转录加Real time PCR扩增这个基因的保守区段，针对这个扩增片段的探针用FAM标记。同时引入内参GAPDH，用ARMS的方法设计扩增GAPDH的DNA片段，针对这个扩增片段的探针用HEX标记。 

该试剂盒通过下述步骤制备： 

1、逆转录、扩增Nucleoprotein靶基因的引物设计和探针设计。 

在Nucleoprotein基因的保守区域设计可以同时使用的逆转录、扩增的引物。 

NP_F:AGAGGAGACAACTGAAGCTAATGC； 

NP_R:CTGATTGCCAAGCTGTTGGA； 

NP-Probe：FAM-CAAGTCTATTCCTTCCGAAATTGGTAGTAG。 

2、逆转录、扩增人GAPDH靶基因的引物设计和探针设计。 

在GAPDH基因的保守区域设计可以同时使用的逆转录的引物。 

GAPDH_F：AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC，这个引物和荧光定量PCR扩增的Forward引物一样。