[发明专利]一种高产间苯三酚的基因工程菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201410722836.2 | 申请日： | 2014-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN104388371B | 公开（公告）日： | 2018-05-04 |
| 发明（设计）人： | 咸漠;赵广;刘敏;曹玉锦;刘长水 | 申请（专利权）人： | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P7/22 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙)11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高产 间苯三酚 基因工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种高产间苯三酚的基因工程菌，其特征在于，是过表达如SEQ ID NO.1所示的碳存储调节因子基因CsrB，并共表达聚酮合成酶基因phlD、多重抗性激活因子基因marA、乙酰CoA羧化酶基因ACCase；所述聚酮合成酶基因phlD，来源于荧光假单胞菌，Genebank ID：11830552；所述多重抗性激活因子marA，来源于大肠杆菌，Genebank ID：6060688；所述乙酰CoA羧化酶基因ACCase，来源于大肠杆菌，其中，亚基accA的Genebank ID：6062185，亚基accB的Genebank ID：6058890，亚基accC的Genebank ID：6058863，亚基accD的Genebank ID：6059083，所述基因工程菌是通过下述方法构建获得的：
1)将T7启动子的序列插入到出发菌株的碳存储调节因子CsrB基因序列前，获得突变菌株；
所述T7启动子来自于表达载体pETDue1，序列如SEQ ID NO.2所示；
所述出发菌株，是大肠杆菌；
所述碳存储调节因子CsrB基因序列如SEQ ID NO.1所示；
2)制备步骤1)所得突变菌株的感受态细胞；
3)构建含有聚酮合成酶基因phlD、多重抗性激活因子marA、乙酰CoA羧化酶基因ACCase的重组质粒；
4)将步骤3)所得的重组质粒导入到步骤2)所得的感受态细胞中，获得重组细胞。
2.一种权利要求1所述基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤如下：
1)将T7启动子的序列插入到出发菌株的碳存储调节因子CsrB基因序列前，获得突变菌株；
所述T7启动子来自于表达载体pETDue1，序列如SEQ ID NO.2所示；
所述出发菌株，是大肠杆菌；
所述碳存储调节因子CsrB基因序列如SEQ ID NO.1所示；
2)制备步骤1)所得突变菌株的感受态细胞；
3)构建含有聚酮合成酶基因phlD、多重抗性激活因子marA、乙酰CoA羧化酶基因ACCase的重组质粒；
4)将步骤3)所得的重组质粒导入到步骤2)所得的感受态细胞中，获得重组细胞。
3.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤(1)所述大肠杆菌，是大肠杆菌E.coliBL21(DE3)。
4.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤3)所述聚酮合成酶基因phlD，来源于荧光假单胞菌，Genebank ID：11830552；所述多重抗性激活因子marA，来源于大肠杆菌，Genebank ID：6060688；所述乙酰CoA羧化酶基因ACCase，来源于大肠杆菌，其中，亚基accA的Genebank ID：6062185，亚基accB的Genebank ID：6058890，亚基accC的Genebank ID：6058863，亚基accD的Genebank ID：6059083。
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