[发明专利]一个与心肌梗死易感相关的miR-27a基因单核苷酸多态位点的检测方法及其应用

权利要求书

1.与心肌梗死易感相关的miR-27a基因，其特征在于：所述miR-27a基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO: 1所示的序列；

其中，SEQ ID NO: 1所示的序列中，第295位为T。

2.根据权利要求1所述的与心肌梗死易感相关的miR-27a基因，其特征在于：所述miR-27a基因的单核苷酸多态位点为：rs895819，等位基因点对为T/C（即SEQ ID NO: 1所示的序列中第295位的核苷酸）；

所述单核苷酸多态位点rs895819与心肌梗死易感程度相关。

3.权利要求1-2任意一项所述的一个与心肌梗死易感相关的miR-27a基因单核苷酸多态位点的检测方法，其特征在于：它包括以下步骤：

步骤一，确定miR-27a基因的单核苷酸多态位点（rs895819），即SEQ ID NO: 1所示的序列中第295位的核苷酸；

步骤二，采用聚合酶链式反应－连接酶链式反应（PCR-LDR）的分子生物学技术检测所检测样品中的miR-27a基因是否存在单核苷酸多态性以及单核苷酸多态的类型。

4.根据权利要求3所述的一个与心肌梗死易感相关的miR-27a基因单核苷酸多态位点的检测方法，其特征在于：所述步骤二中，所述聚合酶链式反应体系为：每个所述样品进行一个总体积为20ul体系的扩增反应，体系中包含制备的基因组DNA稀释液1ul，2mM dNTP 2ul，3mM MgCl2 0.6ul，扩增引物各0.5ul，1×Buffer 2ul，1个单位的Taq DNA聚合酶0.5ul，1×Q solution 4ul，最后加入ddH2O将总体积配为20ul；

所述聚合酶链式反应程序为：反应在95℃预变性15分钟后，进行35个94℃变性30秒，59℃退火1分30秒，72℃延伸1分钟的扩增循环，最后进行72℃10分钟的补平。

5.根据权利要求3所述的一个与心肌梗死易感相关的miR-27a基因单核苷酸多态位点的检测方法，其特征在于：所述步骤二中，所述连接酶链式反应体系以总量10μL计包括：PCR 产物1ul，特异性探针1ul，1×Buffer 1ul，2个单位的连接酶0.05ul，最后加ddH₂O 补足10ul；

所述连接酶链式反应程序为：反应在95℃预变性2分钟后，进行30个94℃变性15s，50℃反应25s的循环反应。

6.用于检测权利要求1-2任意一项所述的与心肌梗死易感相关的miR-27a基因的单核苷酸多态位点的引物，其特征在于：所述引物如下：

SEQ ID NO: 1所示序列的扩增引物：

正向引物：5’-AGGATGGCAGGCAGACAG-3’（SEQ ID NO: 2）

反向引物：5’-ATCACATTGCCAGGGATTTC-3’（SEQ ID NO: 3）。

7.用于检测权利要求1-2任意一项所述的与心肌梗死易感相关的miR-27a基因的单核苷酸多态位点的特异性探针，其特征在于：所述特异性探针如下：

FAM探针：

5’-CCAAGTCGTGTTCACAGTGGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC-3’ (SEQ ID NO: 4)

T探针：

5’- TTTTTTTTTTTTTTTTTGCTGCTTGTGAGCAGGGTCCACA -3’ (SEQ ID NO: 5)

C探针：

5’- TTTTTTTTTTTTTTTGCTGCTTGTGAGCAGGGTCCACG -3’ (SEQ ID NO: 6)。

8.用于检测与心肌梗死易感相关的miR-27a基因的单核苷酸多态位点的试剂盒，其特征在于：它包括权利要求6所述的用于检测与心肌梗死易感相关的miR-27a基因的单核苷酸多态位点的引物，以及权利要求7所述的用于检测与心肌梗死易感相关的miR-27a基因的单核苷酸多态位点的特异性探针。

9.与心肌梗死易感相关的miR-27a基因的单核苷酸多态位点在对心肌梗死的辅助诊断和对个体是否具有心肌梗死易感性进行判断的应用，其特征在于：所述miR-27a基因的单核苷酸多态位点为权利要求2所述的rs895819。