[发明专利]痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶及其应用

权利要求书

1.痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO.1所述。

2.编码权利要求1所述痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶的基因，其特征在于该基因的核苷酸序列paiI如SEQ ID NO.2所述。

3.包含权利要求2所述核苷酸序列的重组质粒pET20b-paiI。

4.包含权利要求3所述核苷酸序列的重组质粒pET20b-paiI的制备方法，其特征在于构建步骤为：将经序列优化获得的基因paiI和pET20b用内切酶Nde I和xho I酶切，连接构建重组质粒pET20b-paiI，获得重组质粒pET20b-paiI。

5.含有权利要求4所述重组质粒pET20b-paiI的宿主细胞为大肠杆菌BL21 (DE3)。

6.痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶的纯化方法，其特征在于挑取含重组质粒pET20b-paiI的大肠杆菌摇菌培养；当培养至OD₆₀₀达到0.6-0.8，用终浓度0.5 mM IPTG诱导6-8 h；离心收集菌体并洗涤；用镍离子亲和柱纯化：向洗涤后的菌体中加入1×Binding Buffer重悬菌体，超声破碎菌液后离心，然后取离心液上样，再用1×Binding Buffer洗柱子除去未结合的蛋白质，最后用含有400 mM咪唑的洗脱液洗脱，即得目标蛋白。

7.权利要求1所述痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶在协同催化制备共轭亚油酸中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于以植物油为原料，痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶和米根霉脂肪酶进行联合协同催化；其中，痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶为天然酶或重组酶的游离形式或固定化形式，米根霉脂肪酶为天然酶或重组酶的游离形式或固定化形式。