[发明专利]氢离子转运无机焦磷酸酶基因表达差异在番茄耐盐性上的应用

权利要求书

1.一种用于测定番茄耐盐性的H⁺-PPase特异性引物，它具有SEQ ID NO:1-2所示的核苷酸序列：

H⁺-PPase  Forwoard: aatgaagagtgttggaagtgct gct

Reverse: cac gcacggtggt cttctcttca。

2.一种采用权利要求1所述的特异性引物进行番茄耐盐性测定的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

    （1）以5-6叶番茄苗为材料，取番茄植株第一片成熟叶，离体叶片用蒸馏水冲洗3次，去离子水冲洗1次，叶片用剪刀剪成1×2cm大小的长方形，然后用去离子水冲洗3次，吸水纸吸干水分；

（2）选择化学纯的NaCl，5-8%（w/w），处理时间为2-6min,提取叶片总RNA；

(3)将得到的cDNA溶液用于下一步PCR扩增；

（4） Real-time PCR 

 引物设计：

H⁺-PPase  Forwoard: aatgaagagtgttggaagtgct gct

Reverse: cac gcacggtggt cttctcttca

    Real-time PCR反应体系：

模板：3ul

引物（0.4nM）：2ul

All-in-one：10ul

MOX：0.4ul

水：2.6ul。

3.权利要求1所述番茄耐盐性的测定方法，其中所述的取番茄植株第一片成熟叶指的是从上往下数的第一片成熟叶。

4.权利要求1所述番茄叶片耐盐性的测定方法，其中所述的NaCl，5%（w/w），处理时间为2min。

5.权利要求1所述番茄叶片耐盐性的测定方法可在不同基因型番茄苗耐盐性方面应用。