[发明专利]一种毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014及其培养方法和应用

权利要求书

1.一种毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014,保藏编号为CGMCC NO.9300。

2.如权利要求1所述的毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014的培养方法，其特征在  于步骤如下：

取4℃冰箱保存的毕赤酵母Pichia sp.SIT2014 斜面菌种，挑取一环菌种接入到装有15ml种子培养基的100ml摇瓶中，在摇床上控制温度为30℃、转速为180rpm培养12-18h得到种子液；

然后按种子液：发酵培养基的体积比为5%的接种量，将种子液接种到发酵培养基中，在摇床上控制温度为30℃、转速为180rpm进行发酵培养15-24h，得到的发酵液离心，收获得到毕赤酵母Pichia sp.SIT2014细胞；

以上所述的种子培养基、发酵培养基相同，按每升计算，含葡萄糖15g，胰蛋白胨5g，酵母粉5g，K₂HPO₄ 0.5g，KH₂PO₄ 0.5g，NaCl 1g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，余量为水。

3.利用如权利要求1所述的毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014作为生物催化剂催化前体2-羟基芳基乙酮不对称还原为手性芳基邻二醇；

所述的2-羟基芳基乙酮为2-羟基苯乙酮、2-羟基间氯苯乙酮，2-羟基邻氯苯乙酮、2-羟基对溴苯乙酮或2-羟基对氯苯乙酮；

对应所得的手性芳基邻二醇为S构型的苯乙二醇、S构型的间氯苯乙二醇、S构型的邻氯苯乙二醇、S构型的对溴苯乙二醇或S构型的对氯苯乙二醇。

4.如权利要求3所述的利用毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014作为生物催化剂催化前体2-羟基芳基乙酮不对称还原为手性芳基邻二醇的方法，其特征在于具体包括如下步骤：

（1）、培养毕赤酵母细胞Pichia sp.SIT2014

取4℃冰箱保存的毕赤酵母Pichia sp.SIT2014 斜面菌种，挑取一环菌种接入到装有15ml种子培养基的100ml摇瓶中，在摇床上控制温度为30℃、转速为180rpm进行种子培养12-18h，得到种子液；

然后按种子液：发酵培养基的体积比为5%的接种量，将种子液接种到发酵培养基中，在摇床上控制温度为30℃、转速为180rpm进行发酵培养15-24h，得到的发酵液离心，收获的细胞即为毕赤酵母细胞Pichia sp.SIT2014细胞，然后将其置于缓冲液中保存；

以上所述的种子培养基、发酵培养基相同，按每升计算，含葡萄糖15g，胰蛋白胨5g，酵母粉5g，K₂HPO₄ 0.5g，KH₂PO₄ 0.5g，NaCl 1g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，余量为水；

所述的缓冲液为pH为5.5-8.0的磷酸钠水溶液，其用量按毕赤酵母细胞Pichia sp.SIT2014干重：缓冲液为5-100g：1L的比例计算；

（2）、向步骤（1）所得的含有毕赤酵母Pichia sp.SIT2014细胞的缓冲液中加入2-羟基芳基乙酮，然后控制温度为30-50℃进行还原反应3-48h得到反应液；

上述反应所用2-羟基芳基乙酮的量，按毕赤酵母Pichia sp.SIT2014细胞干重：2-羟基芳基乙酮为5-100g：5-100mmol的比例计算；

（3）、将步骤（2）的反应液控制转速为10000r/min进行离心分离，得到的上清液用等体积的乙酸乙酯萃取三次后，萃取液用无水硫酸钠干燥后用旋转蒸发仪蒸干，即得手性芳基邻二醇。

5.如权利要求4所述的利用毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014作为生物催化剂催化前体2-羟基芳基乙酮不对称还原为手性芳基邻二醇的方法，其特征在于步骤（1）中所述的缓冲液为pH为5.5～7.0的磷酸钠水溶液。