[发明专利]一种毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014及其培养方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种酵母菌及其用途，更具体的说是涉及一种毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014及其培养方法和利用其作为生物催化剂制备手性芳基邻二醇的方法。

背景技术

手性化合物在人类生活中有着重要的作用，由于同一种化合物的两种对映体在药理、毒理以及功能作用上面都存在巨大的差异，因此制备光学纯的手性模块化合物在医药、农药、环保、材料等领域都具有重要的意义。

而光学纯的手性芳基邻二醇，如(S)-苯乙二醇不仅是液晶材料中不可缺少的手性添加剂，也是合成许多光学活性药物以及一些功能材料的重要中间体。手性芳基邻二醇一般有两种合成的方法。

一种为外消旋体二醇的动力学拆分合成方法。该方法存在的一个不足在于它的理论产率只有50%。

第二种方法为前体酮的不对称还原合成方法。相比于第一种方法，该方法的理论产率可以达到100%的光学纯的手性二醇的化合物。目前，有很多方法可以应用到手性二醇的制备上，主要集中于化学法和生物法，Hatakeyama等（ Hatakeyama, Taito etal. Process for producing optically active alcohols. U.S. Pat. Appl. Publ., 20110282077, 17 Nov 2011）利用化学催化剂钌复合物对前体羟基苯乙酮进行还原得到(S)-苯乙二醇，光学纯度值最高为94.6%，且反应过程中用到手性催化剂以及有机溶剂对环境污染造成一定影响。

2008年魏东芝等（魏东芝、林金萍、高琼，一种微生物不对称拆分制备S-苯乙二醇的方法，中国专利，专利号ZL200810038899.0，授权公告日，2013年1月2日）研究一种微生物作为催化剂制备S-苯乙二醇，该方法虽然得到的手性化合物光学纯度值较高，可达99.9%，制备过程对环境友好，但采用动力学拆分的方法，而动力学拆分的理论产率最高为50%。实际转化率只有38%，且反应时间较长，需要33-96h。

2009年张荣珍等（张荣珍、徐岩、耿亚维，一种羰基还原酶重组菌高效制备(S)-苯基乙二醇的方法，中国专利，专利号ZL200910263147.9，授权公告日，2012年5月23日）利用羰基还原酶重组菌，可以高产率高选择性的催化羟基苯乙酮还原为(S)-苯乙二醇。不过基因工程菌在传代过程中具有潜在的质粒丢失风险造成其传代稳定性较差，在培养过程中需要加入昂贵的诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷和抗生素，致使发酵废液的环境治理成本提升，而且未见其应用于合成其它结构的手性芳基乙二醇。

综上所述，手性芳基邻二醇的制备方法或者存在合成步骤复杂环境不友好，或者光学纯度以及产率低，或者菌种稳定性差、底物谱狭窄等问题而难以实现工业化。因此有必要开发一种具有较广底物应用范围的、具有较高活性和选择性的羰基还原酶生物催化剂来克服上述技术难题。

发明内容

本发明目的之一在于提供一种毕赤酵母Pichia sp.SIT2014 CGMCC NO.9300。

本发明的目的之二在于提供一种上述的毕赤酵母Pichia sp.SIT2014 CGMCC NO.9300的培养方法。

本发明目的之三在于提供一种将毕赤酵母Pichia sp.SIT2014 CGMCC NO.9300作为生物催化剂应用的方法，即将毕赤酵母Pichia sp.SIT2014 CGMCC NO.9300作为生物催化剂，催化多种前体2-羟基芳基乙酮不对称还原为相应的手性芳基邻二醇，均可获得99%以上的转化率和光学纯度。该手性芳基邻二醇的微生物制备方法中，手性芳基邻二醇反应时间短，仅需3-24h,转化率高，最高可达99.9%。

本发明的技术方案

一种毕赤酵母Pichia sp.SIT2014，是一种属于真菌类酵母菌属的菌株，该菌株是从中国上海地区土壤中分离得到的，于2014年06月16日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO.9300，保藏机 构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所，邮编：100101。

上述的毕赤酵母Pichia sp.SIT2014 CGMCC NO.9300菌株具有如下微生物学特征：

（1）、形态特征